Setengah SIM asas, penyediaan dan kegunaan



The setengah SIM Ia adalah agar semisolid dan berbeza, yang direka khas untuk membantu mengenal pasti beberapa bakteria, terutamanya dari Enterobacteriaceae keluarga. Ia terdiri daripada triptein, peptone, sulfat besi, ammonium sulfate, natrium thiosulfate dan agar.

Media ini membolehkan pelaksanaan tiga ujian penting: pengeluaran hidrogen sulfida (H2S), pembentukan indole dan motilinya, dengan itu akronim SIM. Oleh kerana kegunaannya yang besar, ia tidak dapat dikurangkan dalam makmal bakteria.

Tidak seperti media lain, ini mestilah separa pepejal supaya kapasiti pergerakan beberapa bakteria dapat dikesan. Dalam pengertian ini, ujian ini berfungsi dengan baik untuk Enterobacteriaceae, tetapi tidak dalam bakteri Gram-negatif, tanpa fermentasi, di mana ia lebih suka menggunakan kaedah lain, misalnya,.

Media SIM membolehkan membezakan beberapa sifat tertentu yang mencirikan beberapa bakteria yang berkaitan dengan orang lain. Contohnya Escherichia coli ia dibezakan dengan menjadi H2S (-), Indole (+) dan motilitas (+), manakala Proteus mirabilis itu H2S (+), indole (-), motiliti (+).

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kuasa sumber
    • 1.2 Pengeluaran hidrogen sulfida
    • 1.3 Pembentukan Indole
    • 1.4 Motivasi
  • 2 Persediaan
    • 2.1 Separuh SIM
    • 2.2 Reaktor Kovac
    • 2.3 reagen Erlich
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 Seeded
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Had
  • 6 Rujukan

Yayasan

Ia adalah medium budaya yang dianggap pembezaan, kerana kegunaannya membezakan antara mikroorganisma yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida dari yang tidak; juga menyoroti mereka yang membentuk indole dari tryptophan yang tidak membentuknya, dan akhirnya membezakan motil dari bakteria yang tidak bergerak.

Sumber kuasa

Sebagai mana-mana media budaya, ia mempunyai unsur-unsur yang menyediakan nutrien yang diperlukan supaya mikroorganisme yang tidak menuntut dapat berkembang. Unsur-unsur ini diwakili oleh peptones dan tripteína.

Perkembangan mikroorganisma di alam sekitar adalah penting untuk dapat melihat kehadiran atau ketiadaan ciri-ciri yang dinilai oleh media ini.

Pengeluaran hidrogen sulfida

Huruf S dari singkatan SIM merujuk kepada pengeluaran hidrogen sulfida (H2S). Bakteria yang mampu membentuk hidrogen sulfida akan mengambil sulfur natrium thiosulfat.

Setelah H terbentuk2S - gas tanpa warna - ini bertindak balas dengan garam besi yang hadir dalam medium, membentuk sulfida feros, jelas kelihatan (mendakan hitam). Bakteria yang tidak membentuk H2S, tinggalkan tengah warna asal (krem).

Keadaan mendakan hitam boleh menghalang tafsiran motilitas. Walau bagaimanapun, diketahui bahawa majoriti enterobakteria yang menghasilkan H2S adalah motilitas positif, seperti Salmonella, Proteus dan Citrobacter. Di samping itu, endapan hitam yang merangkumi hampir keseluruhan medium, menunjukkan motilitas positif.

Latihan Indole

Surat kedua akronim SIM adalah "I", yang mewakili pembentukan indole.

Dalam pengertian ini, tripteína, sebagai tambahan kepada sumber nutrien, memenuhi fungsi asas lain. Peptone ini kaya dengan asid amino yang dipanggil tryptophan, oleh itu ia dapat menunjukkan bakteria yang menghasilkan tryptophanase.

Enzim ini bertanggungjawab untuk memotong tryptophan asid amino, dengan pembentukan indole (bahan tidak berwarna), asid piruvat dan ammonium..

Itulah sebabnya, untuk menunjukkan tindak balas ini adalah perlu untuk menambahkan bahan yang mendedahkan (reagen Ehrlich atau reagen Kovac). Sama ada yang bertindak balas dengan indole, membentuk zat merah-fuchsia berbentuk cincin di permukaan agar. Sekiranya cincin fuchsia muncul ujian indole ditafsirkan sebagai positif.

Bakteria yang tidak mempunyai enzim ini, tidak akan membentuk cincin dan ditafsirkan sebagai ujian indole negatif.

Yang penting, ujian indole harus ditafsirkan reagen yang terakhir seperti yang pernah berkata, medium itu keruh mencegah paparan motilitas.

Motivasi

Akhirnya huruf "M" dari SIM perkataan bermaksud motilitas. Untuk menilai motilitas, medium ini adalah tempat yang sesuai separa pepejal, kerana ciri-ciri ini adalah penting untuk melihat sama ada atau tidak pergerakan bakteria. Bakteria yang mempunyai flagella adalah yang memberi ujian positif ini.

Ujian positif akan terbukti apabila kekeruhan diperhatikan, kedua-dua inokulum awal, dan di sekelilingnya. Walaupun, bakteria bukan mudah alih hanya berkembang dalam laluan inokulum awal.

Persediaan

Separuh SIM

Timbang 30 g medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air sulingan. Campuran dibiarkan selama 5 minit dan kemudian dipanaskan hingga mendidih, sering kacau sehingga dibubarkan sepenuhnya..

Bagikan campuran dalam tiub ujian dengan penutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan rak tiub dari autoklaf dan biarkan ia mengukuhkan kedudukan tegak, supaya medium berada dalam bentuk blok..

Untuk penyimpanan, ia disimpan di dalam peti sejuk sehingga ia digunakan. Medium yang disediakan mesti mempunyai pH terakhir sebanyak 7.3 ± 0.2.

Pada masa mensoculated medium, ia mestilah pada suhu bilik. Warna medium adalah kuning air.

Reagen Kovac

Ukur 150 ml amil atau isoamil atau butil alkohol. (Gunakan salah satu daripada tiga yang disebutkan).

Larutkan 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Kemudian, perlahan-lahan menambah 50 ml asid hidroklorik pekat.

Reagen yang sedia untuk digunakan tidak berwarna atau berwarna kuning. Ia perlu disimpan dalam botol ambar dan disimpan dalam peti sejuk. Jangan gunakan jika ia mengambil warna coklat gelap; yang menunjukkan bahawa ia rosak. Reagen ini lebih disukai apabila berurusan dengan enterobakteria.

Reagen Erlich

Timbang 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde dan dibubarkan dalam 190 ml mutlak etil alkohol dan perlahan-lahan dicampur dengan 40 ml asid hidroklorik pekat. Pastikan reagen Kovac dengan cara yang sama. Reagen Ehrlich digunakan lebih untuk bakteria bukan fermentasi dan anaerob.

Kegunaan

Media SIM sangat digunakan dalam makmal bakteriologi. Ia mempunyai kelebihan bahawa dalam tiub yang sama tiga ciri penting dapat dilihat dalam pengenalan Enterobacteriaceae.

Sown

Cara yang betul untuk menyemai medium ini adalah dengan menggunakan jarum, yang mana sebahagian daripada jajahan tulen yang akan dikaji diambil dan dimasukkan ke dalam pusat media menegak. Tujahan tunggal mesti dibuat. Tusuk tidak boleh sampai ke bahagian bawah tiub, perkara yang betul adalah untuk menutup hanya dua pertiga kedalaman.

Ia tidak digalakkan untuk mengulangi inokulum, kerana ini boleh membawa kepada tafsiran palsu motiliti positif. Media inokulasi diinkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 jam.

Menyimpulkan waktu yang diamati jika ada atau tidak produksi H2S dan motilitas dibaca. Akhirnya indole diturunkan, dengan menambah 3 hingga 4 titisan reagen Ehrlich atau Kovac, ia dicampurkan dengan lembut dan ditafsirkan.

Kawalan kualiti

Sebagai kawalan steril, satu atau dua tiub diinkubkan tanpa inokulasi dalam ketuhar pada 37 ° C selama 24 jam. Diharapkan selepas masa ini tidak akan ada pertumbuhan atau perubahan warna.

Sebagai kawalan kualiti, strain yang diperakui diperakui boleh digunakan, seperti: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Keputusan yang dijangka adalah: Escherichia coli H2S negatif, motosikal indole dan positif, Enterobacter aerogenes hanya motiliti positif, Salmonella typhimurium H2S dan motiliti positif, dengan indole negatif. Proteus vulgaris semua positif, sementara Klebsiella pneumoniae dan Shigella sonnei semua negatif.

Had

-Sesetengah jenis Morganella morganii, antara jenis lain boleh menghasilkan pigmen berwarna coklat pada medium ini kerana pengeluaran melanin, ini tidak boleh dikelirukan dengan pendarahan ferida sulfida. Dalam profesional yang tidak berpengalaman, keadaan ini boleh menghasilkan positif palsu dalam tafsiran ujian H2S.

-Bakteria aerobik ketat hanya akan tumbuh di permukaan tiub, yang menjadikannya sukar untuk mentafsir motilitas.

Rujukan

  1. BD Laboratories Medium SIM BBL. 2008. Boleh didapati di: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM Medium. Boleh didapati di: keselamatan makanan
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Boleh didapati di: http://f-soria.es
  4. Makmal Brizuela-Lab SIM Medium. Boleh didapati di: .brizuela-lab.com
  5. Makmal Britania. SIM Medium. 2015. Boleh didapati di: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.