Baird Parker Agar asas, penyediaan dan penggunaan



The Baird Parker agar ia adalah medium budaya pepejal, terpilih dan berbeza. Ia dicipta pada tahun 1962 untuk pengiraan dan koagulase positif pengiraan Staphylococcus (Staphylococcus aureus).

Ia terdiri daripada kasein hidrolyzate pankreas, ekstrak daging, ekstrak ragi, lithium klorida, glisin, natrium piruvat, kalium tellurit, agar dan telur kuning telur.

Baird Parker agar berdasarkan kepada kemampuan S. aureus mengurangkan titur dan menghasilkan lecithinase. Kedua-dua sifat menjana tanah jajahan dengan ciri-ciri khusus untuk spesies ini. Oleh itu, ia menawarkan keberkesanan hebat dalam mengesan mikroorganisma ini.

Tanah jajahan tipikal S. aureus mereka kelabu hitam atau gelap, dengan sempadan tanpa warna dan halo yang jelas yang mengelilingi mereka, membezakan diri mereka dari seluruh mikroorganisma. Patogen ini boleh didapati dalam sampel klinikal, perairan, kosmetik dan makanan mentah atau dimasak.

Diagnosis atau pengesanannya sangat penting, kerana pelbagai patologi yang dihasilkannya, seperti keracunan makanan, sindrom kulit yang melecur, sindrom kejutan toksik, abses, meningitis, septikemia, endokarditis, dan lain-lain..

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kuasa pemakanan
    • 1.2 Selektif
    • 1.3 Berbeza
  • 2 Persediaan
    • 2.1 emulsi kuning telur
    • 2.2 Potassium tellurite pada 1% w / v
    • 2.3 Penyediaan medium budaya
  • 3 Gunakan
    • 3.1 sampel klinikal
    • 3.2 Sampel makanan
    • 3.3 Sampel air
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Cadangan
  • 6 Rujukan

Yayasan

Kuasa berkhasiat

Hydrolyzate pankreas kasein, ekstrak daging dan ekstrak ragi adalah sumber nutrien, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk perkembangan mikrobial umum, manakala pyruvate dan glisin adalah sebatian yang memihak kepada pertumbuhan spesifik Staphylococcus aureus.

Selektif

Baird Parker agar adalah selektif kerana ia mengandungi bahan yang menghalang pertumbuhan flora yang menyertainya, sambil mempromosikan pembangunan S. aureus. Senyawa menghambat ialah lithium chloride dan potassium tellurite.

Pembezaan

Ini bermakna membolehkan membezakan S. aureus Selebihnya Staphylococci negatif koagulase. S. aureus mempunyai keupayaan untuk mengurangkan tellurit kepada tellurium percuma metalik hitam, membentuk koloni kelabu hitam atau gelap.

Begitu juga, kuning telur menyediakan substrat untuk membuktikan kehadiran enzim lecithinase dan lipase. S. aureus ia adalah lecithinase positif dan oleh itu halo yang jelas akan diperhatikan di sekitar koloni, menunjukkan bahawa lesitin telah dihidrolisis.

Dalam pengertian ini, penampilan dalam agar ini koloni kelabu hitam atau gelap cerah dengan cahaya halo di sekitar menunjukkan kehadiran S. aureus. 

Sekiranya zon hujan terbentuk, ia menunjukkan bahawa terdapat aktiviti lipase. Sesetengah jenis S. aureus mereka adalah lipase positif dan negatif lainnya.

Sekiranya bahawa S. aureus Jika lipase positif, zon legap akan diperhatikan di sekitar koloni kelabu hitam atau gelap, dan kemudian halo yang jelas disebabkan oleh tindakan lecithinase..

Koloni bakteria selain daripada S. aureus mampu berkembang dalam medium ini akan mengembangkan koloni tanpa warna atau coklat, tanpa halo sekitar.

Koloni hitam atipikal juga boleh diperhatikan dengan atau tanpa sempadan tanpa warna, tetapi tanpa halo yang jelas. Tanah jajahan ini tidak boleh diambil kira, mereka tidak sepadan dengannya S. aureus.

Persediaan

Emulsi kuning telur

Ambil telur ayam segar, basuh dengan baik dan letakkannya 2 hingga 3 jam dalam alkohol 70%. Kemudian, telur terbuka secara aseptik dan putih telur dipisahkan dengan teliti dari kuning telur. Selepas itu 50 ml kuning kuning diambil dan dicampur dengan 50 ml larutan fisiologi steril.

Tellurite potassium pada 1% w / v

Sesetengah rumah komersial menjual 1% kalium tellurite yang sedia untuk digunakan. Ia ditambah ke medium sebelum medium menegaskan.

Untuk menyediakan penyelesaian ini di makmal berat 1.0 g kalium tellurite dan larut dalam sebahagian daripada air. Selanjutnya jumlah air siap hingga 100 ml. Penyelesaiannya mesti disterilkan oleh kaedah penapisan.

Penyediaan medium budaya

Timbang 60 g medium dehidrasi dan larut dalam 940 ml air sulingan. Biarkan campuran beristirahat selama kira-kira 5 hingga 10 minit.

Sapukan haba dengan menggerakkan medium dengan kerap untuk memperbaiki proses pembubaran. Biarkan mendidih sebentar. Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Biarkan berdiri sehingga mencapai suhu 45 ° C dan tambah 50 ml emulsi kuning telur dan 10 ml 1% tellurit. Campurkan dengan baik dan sediakan 15 hingga 20 ml pada hidangan petri steril.

Benarkan mengukuhkan, memerintahkan terbalik dalam plak dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

PH akhir medium disediakan hendaklah pada 6.8 ± 0.2.

Sebelum menanam sampel, tunggu sehingga plat mengambil suhu ambien. Sapu piring dengan mengerikan atau dengan menanam di permukaan dengan spatula Drigalski.

Warna medium dehidrasi adalah tan cahaya dan warna medium yang disediakan adalah ambar ringan.

Guna

Sampel klinikal

Sampel klinik dibuang secara langsung dengan menunaikan sebahagian bahan di salah satu ujung plat, dan dari sana ia mengeras dengan keletihan. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C.

Sampel makanan

Timbang 10 g sampel makanan dan homogenisasi dalam 90 ml 0.1% air peptonated, pelarutan disediakan dari sana, jika perlu. Inoculate piring dalam tiga kali ganda dengan 0.3 ml penyelesaian yang disediakan, dan sow di permukaan dengan spatula Drigalski. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C.

Metodologi ini membolehkan untuk mengira koloni biasa yang diperoleh dan sesuai apabila kehadiran S. aureus di atas 10 sampel CFU per g / ml.

Jika anda mengesyaki bahawa jumlah S. aureus ia kecil atau terdapat banyak flora yang disertakan, disarankan untuk memperkayakan sampel dalam sup soy triptikase dengan 10% NaCl dan 1% natrium piruvat. Ini akan memihak kepada pertumbuhan S. aureus dan akan menghalang perkembangan flora yang disertakan. Tiub yang berawan akan dibiakkan pada Baird Parker agar.

Sampel air

Dalam sistem penapisan vakum dan disterilkan, 100 ml air ditapis, dan kemudian membran micropor 0.4 mikron dikeluarkan dengan pengapit steril dan diletakkan pada plat Baird Parker. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C. Teknik ini membolehkan penghitungan koloni tipikal S. aureus.

Kawalan kualiti

Untuk menilai kualiti Baird Parker agar, strain yang diketahui boleh digunakan, seperti Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Dalam kes strain S. aureus ATCC diketahui mengurangkan tellurit, dan mereka adalah lipase positif dan lesitinase. Oleh itu, mesti ada perkembangan yang memuaskan dan menanam koloni cembung dengan pusat hitam dan kelebihan tanpa warna, dengan halo opaque dan halo lain yang lebih jernih luaran.

Sebaliknya, S. epidermidis Pembangunan miskin dijangka dalam medium ini, dengan coklat-coklat ke koloni hitam, tiada halo yang jelas.

Untuk E. coli dan P. mirabilis ia dijangka sepenuhnya atau sebahagiannya dihalang. Dalam kes pertumbuhan, koloni coklat akan berkembang tanpa zon legap, atau halo jelas.

Cadangan

-Media tidak boleh dipanaskan setelah menambah tellurite dan kuning telur.

-Penyediaan emulsi kuning telur dan penambahannya dalam medium adalah langkah kontaminasi yang sangat terdedah. Penjagaan yang teruk mesti diambil.

-Sekiranya terdapat kehadiran koloni khas S. aureus mesti disokong dengan memasang ujian koagulase untuk ketegangan tersebut.

-Sekiranya terdapat keputusan ragu dengan koagulase, ujian pengesahan yang lain mesti dipasang.

-Berhati-hati untuk tidak mengelirukan kehadiran koloni tipikal S. aureus dengan koloni warna hitam atipikal.

Rujukan

  1. Penyumbang Wikipedia. Baird-Parker agar. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 15 Mac, 2017, 19:36 UTC. Boleh didapati di: wikipedia.org Diakses pada 18 Februari 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Boleh didapati di: bd.com
  3. Makmal Britania. Baird Parker agar asas. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Boleh didapati di: http://f-soria.es/Inform
  5. Makmal Britania. Tellurium potassium. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Membawa Staphylococcus aureus enterotoxigenic A, dalam nasofaring nasofaring pada penangan makanan. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Covenin Standard Venezuela 1292-89. (1989). Makanan Pengasingan dan pengiraan Staphylococcus aureus. Terdapat dalam:sencamer.gob.ve