Yayasan EC penyediaan, penggunaan dan penggunaan



The Kaldu EC atau sup Escherichia coli Ia adalah medium budaya cecair terpilih. Media ini disyorkan oleh Kaedah-Kaedah Standard untuk menghitung koliform total dan fecal, dengan teknik nombor yang paling mungkin (NMP) dalam sampel air dan makanan, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Susu EC terdiri daripada triptein, laktosa, garam hempedu, fosfat dipotassium, monopotassium fosfat, natrium klorida dan air. Formula yang direka bentuk secara strategik untuk memihak kepada pertumbuhan koliform total dan fecal dan mencegah perkembangan mikroorganisma yang disertakan.

Bakteria Escherichia coli adalah coliform fecal yang utama sebagai bahan pencemar di dalam air dan sumber makanan, menyebabkan pencernaan gastrointestinal yang penting.

Perlu diingatkan bahawa terdapat banyak serotip Escherchia coli; di antara mereka, kita boleh menyebut enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroaggregative (EAEC).

Ini bermakna mempunyai kapasiti untuk membolehkan pembangunan mereka semua, tetapi tanpa dapat membezakan antara mereka. Untuk melakukan ini, ujian tambahan mesti dilakukan.

Kajian mikrobiologi air dan makanan oleh bilangan yang paling mungkin (NMP) untuk mencari jumlah dan coliform fecal adalah protokol yang disesuaikan dengan beberapa fasa; fasa anggapan, fasa pengesahan dan tahap penyelesaian. Serbuk EC digunakan dalam fasa pengesahan.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 EC EC
    • 1.2 EC sup dikombinasikan dengan novobiocin
  • 2 Persediaan
    • 2.1 EC EC
    • 2.2 EC broth diubah suai dengan novobiocin
  • 3 Gunakan
    • 3.1 Analisis jumlah koliform dan fecal
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Cadangan
  • 6 Rujukan

Yayasan

Kacang EC

Media EC adalah berdasarkan kepada unsur-unsur nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan optimum koliform total dan fecal, di mana bakterinya dimasukkan Escherichia coli.

Unsur-unsur pemakanan ini disediakan oleh triptein, sebagai sumber peptida dan asid amino yang sangat baik. Di samping itu, ia juga mengandungi laktosa, karbohidrat yang boleh diminum yang memberikan tenaga dan membolehkan untuk menunjukkan jika bakteria menghasilkan gas.

Sebaliknya, medium mengandungi garam hempedu yang memberikan watak terpilih, kerana ia menghalang pertumbuhan mikroorganisma Gram-positif yang mungkin terdapat di dalam sampel..

Begitu juga fosfat dipotassium fosfat dan fosfat monopotassium sebagai sistem pengimbangan pH. Sistem ini adalah perlu, kerana laktosa yang terkandung di dalam sup ini cenderung mengasalkan medium apabila ia ditapai oleh mikroorganisma, tetapi ini dikompensasi oleh garam fosfat.

Oleh itu, unsur-unsur ini adalah penting, kerana keasidan yang tidak terkawal dapat menjejaskan perkembangan mikroorganisma yang diperlukan.

Untuk bahagiannya, natrium klorida menstabilkan media secara sederhana, manakala air adalah pelarut larutan yang ada dan menyediakan konsistensi cair kepada medium.

Kacang EC diubah suai dengan novobiocin

Okrend dan Rose mencipta pelbagai EC EC, yang dinamakan EC EC diubahsuai dengan novobiocin. Pengubahsuaian ini terdiri daripada pengurangan kepekatan garam hempedu dan penambahan 20 mg / dl novobiocin.

Pengubahsuaian ini menyokong pemulihan ketegangan Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Serotype bakteria ini menyebabkan kolitis hemorrhagic yang boleh menyebabkan sindrom uremik hemolitik (HUS); yang seterusnya boleh menyebabkan kegagalan buah pinggang akut, dengan kadar kematian yang tinggi yang boleh mencapai sehingga 50% pada orang tua.

Oleh kerana morbiditi dan kematian yang disebabkan oleh bakteria setiap tahun akibat penggunaan makanan tercemar, Jabatan Pertanian Amerika Syarikat (USDA) secara meluas mencadangkan penggunaan cara ini.

Persediaan

Kacang EC

Timbang 37.4 gr daripada medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air sulingan. Campuran perlu dibiarkan berehat selama 5 minit. Selanjutnya, dalam sumber haba, larut secara larut.

Sebaik sahaja dibubarkan, ia diagihkan dalam tiub ujian sebelum ini dikondisikan dengan tiub Durham di dalamnya. Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

PH medium hendaklah 6.9 ± 0.2. Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan disediakan adalah ambar ringan.

Anggur disimpan dalam peti sejuk sehingga ia digunakan. Pada masa penggunaan sup mesti berada pada suhu bilik.

Sebaliknya, sup EC juga boleh disediakan pada kepekatan dua kali ganda.

Kacang EC diubah suai dengan novobiocin

Timbang 36.7 gr daripada medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air. Selebihnya penyediaan adalah sama seperti yang dijelaskan di atas.

Guna

Analisis jumlah koliform dan fecal

Serbuk EC sangat ideal untuk fasa pengesahan kajian coliform oleh kaedah NMP, baik dalam sampel air, seperti dalam produk farmaseutikal dan makanan.

Kunyit dan bulu pengeluaran gas yang lazat yang diperolehi dalam fasa yang diandaikan perlu dipulihkan dalam 2% hempedu hijau cerah dan sup.

Untuk total coliform, sup ayam EC diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk coliform fecal mereka diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 44 ° C.

Dalam kedua-dua kes ini ditafsirkan dengan cara yang berikut: tiub keruh dengan pengeluaran gas dianggap positif. Jika tiada pengeluaran gas dalam masa 24 jam, pengeraman diteruskan sehingga 48 jam.

Lemak positif EC lulus ke fasa konfirmasi lengkap, yang terdiri daripada reseeding dalam media selektif seperti Mac Conkey agar, EMB agar atau Endo agar..

Jika sup yang digunakan adalah EC yang diubah suai dengan novobiocin, tiub positif disyorkan untuk dipulihkan pada Mac Conkey agar dengan sorbitol.

Kawalan kualiti

Kawalan kualiti mesti dijalankan pada setiap kelompok media yang disediakan. Pertama, kemandulan media mesti dinilai. Dalam pengertian ini, satu atau dua kaldu diinkubasi tanpa mengambil ubat dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C. Hasil yang dijangkakan adalah sup telus, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui harus dinilai, yang mana bakteria berikut dapat digunakan: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kes, perkembangan mikrob yang memuaskan dijangka, memerhatikan sup keruh dengan pengeluaran gas untuk E. coli dan tanpa gas untuk Salmonella.

Strain lain yang boleh dimasukkan ke dalam kawalan adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini mesti dihalang sepenuhnya.

Cadangan

-Penempatan tiub Durham adalah penting untuk kajian coliform.

-Mengedarkan medium dalam tiub ujian sebelum mensterilkan, tidak pernah selepas.

-Jangan gunakan jika medium mempunyai lebih daripada 3 bulan penyediaan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan dalam ciri biasa medium.

Rujukan

  1. Makmal Britania. Medium EC. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorrhagic. Pusat keselamatan makanan dan kesihatan awam. 2010. Boleh didapati di: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Sederhana EC. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen Sederhana EC diubah suai dengan novobiocin. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Pengesanan, pengasingan dan pencirian Escherichia coli pengeluar toksin Shiga dari daging lembu segar dari kedai-kedai daging di Concepción, wilayah Tucumán. Rev Microgol oleh Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Boleh didapati di: www.scielo.org.