Suplemen, penyediaan dan kegunaan lactosado asas



The sup laktosa Ia adalah medium budaya cecair, tidak terpilih, digunakan terutamanya sebagai satu cara untuk pra-pengayaan dalam pengasingan jenis Salmonella daripada analisis mikrobiologi untuk makanan yang diproses, produk tenusu atau air. Ini adalah disyorkan oleh Suruhanjaya Antarabangsa mengenai Spesifikasi Mikrobiologi untuk Makanan (ICMPF).

Medium ini mengandungi pencernaan enzimatik gelatin, ekstrak daging dan laktosa, bahan-bahan yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Di samping itu, laktosa adalah karbohidrat yang boleh fermentasi, jadi beberapa koliform dapat membelahnya dengan pengeluaran gas.

Oleh itu, kuahnya laktosa disyorkan oleh Persatuan Amerika Public Health (APHA) untuk kajian andaian daripada jumlah dan tahi bakteria koliform, memanggil ia satu alternatif terbaik untuk menggantikan lauryl sulfat sup tryptose teknik standard Nombor paling mungkin (NMP ) yang digunakan untuk analisis mikrobiologi sampel makanan, susu dan air permukaan, air bawah tanah, air rekreasi, air sisa domestik dan industri.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 Pra-pengayaan
    • 3.2 Analisis jumlah koliform dan fecal
  • 4 Kawalan kualiti media
  • 5 Rujukan

Yayasan

Untuk analisis mikrobiologi beberapa sampel lebih pra-pengayaan ia adalah penting untuk mendapatkan semula mikroorganisma tertentu yang boleh dalam kuantiti yang sangat rendah atau di bawah keadaan yang menggalakkan yang melanggar kemungkinan atau mengurangkan.

Begitu pula dengan makanan kering dan diproses, mungkin tercemar dengan Salmonellas sp. Dalam kes ini, jika bakteria hadir, mereka mengalami pengabaian fizikal dan kimia semasa proses pengeluaran produk..

Seperti bahawa mikroorganisma terdedah kepada faktor-faktor yang buruk seperti dehidrasi, pendedahan kepada produk yg melarang atau toksik, dan pertindihan yang dihasilkan oleh kehadiran bakteria lain dalam kuantiti yang lebih besar, antara lain.

Dalam pengertian ini, sup laktosa mempunyai kesan membaiki struktur yang rosak mikroorganisma, menyebabkan ia pulih dan membiak, sedemikian rupa sehingga dapat dikesan.

Begitu juga, sup laktosa mempunyai keupayaan untuk mencairkan bahan-bahan menghambat yang boleh menjejaskan daya majunya, yang membolehkan perkembangannya. Di samping itu, komposisi pemakanan sup laktosa adalah strategik untuk memihak kepada pertumbuhan Salmonella sp di atas mikroorganisma lain.

Untuk pengenalpastian muktamad, ia mesti ditanam ke arah lain-lain cara tanaman muktamad.

Sebaliknya, komposisi medium juga membolehkan mengesan mikroorganisma penapaian laktosa yang menghasilkan gas.

Persediaan

Untuk menyediakan satu liter kuah laktosa, timbanglah 13 gram medium dehidrasi dan larut dalam 1000 ml air sulingan.

Untuk membantu membubarkan medium di dalam air, anda boleh memanaskan penyelesaian sedikit, tetapi tidak terlalu banyak..

Sekali homogen, penyelesaian disediakan seperti berikut: jika sup digunakan untuk mencari coliform, rak dengan tiub ujian disediakan, dan tiub penapaian Durham dimasukkan terbalik.

Tiub Durham adalah terperinci yang sangat penting, kerana ia akan membolehkan untuk mengesan pembentukan gas, data berharga dalam mencari coliforms.

Apabila tiub sudah siap, 10 ml kaldu laktosa dibuang ke dalamnya, yang mesti cukup untuk menampung seluruh tiub Durham..

Sekiranya kaldu laktosa akan digunakan sebagai kuah pra-pengayaan, tidak perlu meletakkan tabung penapaian Durham. Dalam kes ini, kuantiti yang lebih besar daripada medium (225 ml) diperlukan, yang akan dihidangkan dalam botol 500 ml, mulut lebar dan dengan topi skru tahan panas.

Selepas itu, tiub atau kepingan diambil ke autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Medium ini harus kekal pada pH akhir sebanyak 6.9 ± 0.2 pada 25 ° C.

Anggur disimpan dalam peti sejuk sehingga ia digunakan.

Sebelum menggunakan, sup hendaklah diabaikan pada suhu bilik.

Sebaliknya, sup laktosa juga boleh disediakan pada kepekatan dua kali ganda.

Sesetengah makmal menambah bromokresol ungu kepada sup laktosa sebagai penunjuk pH, untuk menunjukkan tiub di mana terdapat penapaian laktosa oleh perubahan warna. Dalam kes ini sup akan mengambil warna ungu dan jika penapaian menjadi kuning.

Kegunaan

Dalam makmal mikrobiologi kaldu laktosa digunakan secara meluas sebagai medium yang agak murah yang menawarkan hasil yang boleh dipercayai dan pantas (24-48 jam).

Ia boleh digunakan untuk analisis jumlah dan coliform fecal dalam air dan makanan atau sebagai sup pra-pengayaan untuk Salmonella.

Pra-pengayaan

Pra-pengayaan adalah satu langkah sebelum pengayaan sampel, yang sangat meningkatkan pemulihan bakteria dari genus Salmonella dalam makanan olahan.

Untuk melakukan ini, sampel makanan pepejal (25 gram) atau cecair (25 ml) dibiakkan dalam 225 ml kaldu laktosa, dan diinkubasi selama 24 hingga 48 jam. Selanjutnya, selenium cystine broth atau kaldu tetrathionate akan dibina di dalam medium yang diperkaya. Kemudian ia melewati media selektif XLD dan SS.

Analisis jumlah koliform dan fecal

Ia adalah cara yang sangat baik sebagai penunjuk pencemaran tahi.

Oleh itu, sup laktosa adalah sesuai untuk fasa unjuk kerja kajian koliform oleh kaedah Nombor Paling Kemungkinan.

Bagi sampel di mana sejumlah besar koliform disyaki, kuantiti koliform yang lebih kecil akan diagresik (1 ml), manakala untuk sampel di mana kuantiti koliform yang lebih rendah disyaki, lebih banyak sampel yang diocok (10 ml)..

10 pelinciran dibuat untuk analisis-1, 10-2, 10-3, membentuk bateri 3-5 tiub untuk setiap kepekatan yang digunakan.

Dari setiap pencairan jumlah yang sama disembur ke dalam laktosa.

Tiub diinkubasi selama 24 jam. Broth yang negatif diinkubasi selama 24 jam lebih.

Tafsiran hasil dibuat dengan memerhatikan dua ciri: yang pertama adalah kehadiran atau ketiadaan kekeruhan dan kerana medium ini tidak mengandungi penunjuk pH, tidak akan ada perubahan dalam warna.

Yang kedua adalah pengeluaran atau bukan gas. Gas mudah dibuktikan dalam tabung Durham, dengan penampilan satu atau lebih buih udara dalam.

Ia dianggap positif jika kedua-dua ciri-ciri diperhatikan, iaitu kekeruhan dengan pengeluaran gas. Tiub positif harus dibangkitkan semula dalam media pengesahan (sup Bili Hijau 2% Bile dan EC).

Kawalan kualiti media

- Dalam penyediaan medium, adalah penting untuk tidak lupa meletakkan tiub Durhams jika tujuannya adalah kajian koliform.

- Jangan terlalu panas sebelum mensteril.

- Pengedaran dalam tiub ujian sebelum disterilkan, tidak pernah selepas.

- Jangan gunakan jika medium mempunyai lebih daripada 3 bulan penyediaan.

- Jangan gunakan jika anda perasan apa-apa perubahan dalam ciri biasa media.

- Apabila menyediakan sekumpulan sup laktosa, ujian kualitinya dengan menanam strain yang dikenali sebagai Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii dan Klebsiella pneumoniae. Mereka berkembang dengan baik, dengan pengeluaran gas (kawalan positif).

- Ia juga boleh termasuk Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, yang berkembang dengan baik, tetapi tanpa pengeluaran gas (kawalan negatif).

- Perlu diingat bahawa warna asal media dehidrasi adalah kuning air dan medium disediakan sangat jelas dan kuning telus. Sekiranya terdapat perubahan warna atau penampilan, mungkin terdapat kemerosotan yang sama.

Rujukan

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi dan mikrobiologi alam sekitar. (2013) edisi pertama. University of Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. (2009). Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. Ed ed. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico.
  3. Makmal Conda Pronadisa. 2017. Kepekatan dua kali ganda kalsium laktosa (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Perbandingan teknik untuk pengambilan bakteria koliform dari sedimen tasik Xochimilco, Mexico. Rev argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Boleh didapati di: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Penentuan kualiti mikrobiologi perairan sumur artesian di daerah Central, Cordillera dan jabatan perbandaran Modal. Mem. Inst. Investig. Cienc. Kesihatan 2013; 11 (1): 5-14. Boleh didapati dari: scielo.iics.