Yayasan asas tepung, penyediaan dan kegunaan



The sup urea adalah medium budaya cair, digunakan untuk menunjukkan kehadiran enzim urease dalam mikroorganisme tertentu. Urease adalah enzim mikrob yang dihasilkan secara konkrit, iaitu, ia disintesis secara bebas daripada sama ada substrat yang mana ia bertindak adalah.

Fungsi urease berkaitan dengan penguraian sebatian organik. Tidak semua mikroorganisma dapat mensintesis enzim ini, oleh itu penentuannya dalam makmal membolehkan mengenal pasti beberapa bakteria tertentu dan juga membezakan antara spesies genus yang sama..

Terdapat dua jenis ujian urea: Stuart dan Christensen. Mereka berbeza dalam komposisi dan kepekaan mereka. Yang pertama adalah istimewa untuk menunjukkan sejumlah besar urease yang dihasilkan oleh spesies Proteus genus.

Yang kedua adalah lebih sensitif dan boleh mengesan sejumlah kecil urease lambat dihasilkan oleh bakteria lain seperti Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus dan Helicobacter genera Mycobacterium.

Stuart sup urea terdiri daripada urea, natrium klorida, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, ekstrak yis, fenol merah dan air suling.

Manakala, sup atau urea agar Christensen adalah terdiri daripada pepton, natrium klorida, fosfat monopotassium, glukosa, urea, fenol merah, air suling dan agar. Yang terakhir ini hanya jika ia adalah medium pepejal.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Stuart urea sup
    • 1.2 Christensen sup atau urea agar
    • 1.3 Tafsiran kedua-dua media (Stuart dan Christensen)
  • 2 Persediaan
    • 2.1 Stuart urea sup
    • 2.2 Kuah Christensen atau urea agar
  • 3 Kegunaan
  • 4 Menyemai ujian urea
  • 5 Kawalan kualiti
  • 6 Rujukan

Yayasan

Enzim urease menghidrolisis urea untuk membentuk karbon dioksida, air dan dua molekul ammonia. Sebatian ini bertindak balas untuk membentuk produk akhir yang dipanggil ammonium karbonat.

Stuart urea sup

Kaldu urea Stuart lebih buffered dengan pH 6.8. Oleh itu, mikroorganisma mesti dapat membentuk sejumlah besar ammonium untuk menjadi merah kepada fenol. PH mesti meningkat melebihi 8.

Oleh itu urea sup adalah terpilih untuk Stuart Proteus, menghasilkan keputusan yang positif dalam masa 24 hingga 48 jam pengeraman, dan tidak berkesan untuk bakteria yang menghasilkan kuantiti yang rendah urease atau perlahan-lahan hydrolyze urea.

Ini kerana spesies Proteus dapat menggunakan urea sebagai sumber nitrogen. Sebaliknya, bakteria penghasil urease lain memerlukan sumber tambahan.

Walau bagaimanapun, Pérez et al. (2002) telah menunjukkan bahawa sup urea Stuart adalah secekap urea agar Christensen untuk menentukan urease dalam strain yis daripada genus Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon dan Saccharomyces.

Penulis kajian itu telah mencapai kebetulan 100% dengan kedua-dua media (Stuart dan Christensen) dengan inkubasi selama 24 dan 48 jam; membuat proviso bahawa mereka mengambil sebagai positif strain yang berjaya menjadikan media menjadi warna pink-fuchsia kuat.

Penjelasan ini adalah perlu, kerana Lodder (1970) menegaskan bahawa hampir semua ragi yang bereaksi menjadikan tempat ubi urea agar Christensen menjadi merah jambu pucat. Ini kerana mereka boleh menghidrolisis urea dalam kuantiti minimum, dan pembentukan amina oleh decarboxylation oksidatif asid amino di permukaan. Ini tidak boleh ditafsirkan sebagai positif.

Sup atau urea agar dari Christensen

Suplai urea Christensen atau agar kurang buffered, dapat mengesan sejumlah kecil ammonium. Di samping itu, medium ini diperkaya dengan peptone dan glukosa. Senyawa ini menyebabkan mikroorganisma yang menghasilkan urease lain yang tidak berkembang di sup Stuart untuk berkembang.

Begitu juga, ujian urea Christensen menawarkan hasil yang lebih cepat, terutamanya untuk Proteus, dapat memberi semangat positif dalam masa 30 minit sebagai masa minimum dan sehingga 6 jam sebagai masa maksimum.

Yang lain daripada mikroorganisma urease pengeluar mencapai warna separuh membelok sedikit selepas 6 jam, dan kuat pada 24, 48, 72 jam atau lebih, dan juga beberapa jenis boleh memberi tindak balas lemah selepas 5 atau 6 hari.

Tafsiran kedua-dua media (Stuart dan Christensen)

Mediumnya pada asalnya berwarna kuning-oren dan tindak balas positif akan menjadikan warna medium menjadi pink-fuchsia. Keamatan warna itu berkadar terus dengan jumlah ammonium yang dihasilkan.

Tindak balas negatif akan meninggalkan warna warna asal kecuali ragi, yang boleh memberikan jambu pucat dengan Christensen urea agar.

Persediaan

Stuart urea sup

Timbang gram yang diperlukan mengikut tanda-tanda rumah komersial. Larutkan air disuling yang lebih disukai. Jangan gunakan haba untuk larut, kerana urea sensitif terhadap haba.

Kaedah penapisan membran digunakan untuk mensteril. Untuk ini, penapis Millipore dengan pori diameter 0.45 μ digunakan. Jangan gunakan autoklaf. Apabila penyelesaian ditapis, ia diagihkan dalam tiub steril. Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, ia mesti dipindahkan antara 1.5 ml sebagai kuantiti minimum hingga 3 ml sebagai jumlah maksimum setiap tiub..

Simpan di dalam peti sejuk dan sabar sebelum digunakan.

Sekiranya kaedah penapisan tidak tersedia, medium itu hendaklah digunakan dengan serta-merta untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai.

Satu lagi cara untuk menyediakan sup urea Stuart adalah seperti berikut:

Beberapa rumah komersil menjual separuh asas untuk ujian urea, tidak termasuk urea.

Jumlah yang ditunjukkan oleh rumah komersial ditimbang. Ia dibubarkan dalam air sulingan dan disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Biarkan ia berehat sedikit dan apabila medium panas tambah 100 ml larutan urea yang disediakan pada 20% dan disterilkan oleh penapisan.

Ia diagihkan dalam tiub steril, seperti yang dinyatakan sebelum ini.

Sup atau urea agar dari Christensen

-Penyediaan penyelesaian urea

Timbang 29 gram urea dehidrasi dan larut dalam 100 ml air sulingan. Gunakan kaedah penapisan untuk mensteril. Jangan autoklaf.

-Urea asas agar

Larutkan 24 g daripada asas agar kering dalam 950 ml air sulingan. Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Biarkan berdiri sehingga mencapai suhu 50 ° C dan tambah urea yang telah disediakan secara aseptik.

Tuangkan 4 hingga 5 ml ke dalam tiub steril dan condong hingga padat. Harus ada puncak seruling panjang.

Media ini juga boleh disediakan dalam bentuk cecair.

Kegunaan

Ujian urea sangat berkesan dalam membezakan genus Proteus daripada genera lain dari Keluarga Enterobacteriaceae, memandangkan reaksi pesat yang disediakan oleh Proteus.

Jika komposisi Christensen digunakan, ujian ini membantu membezakan antara spesies genus yang sama. Contohnya, S. haemolyticus dan S. warneri spada Staphylococcus koagulase negatif dan betahemolytic, tetapi mereka berbeza di dalamnya S. haemolyticus ia adalah urea negatif dan S. warneri ia adalah urea positif.

Sebaliknya, McNulty berjaya menggunakan sup 2% Christensen urea untuk mengkaji kehadiran Helicobacter pylori dalam sampel biopsi diambil dari mukosa perut (rantau antral).

Kehadiran H. pylori ia dibuktikan dengan ujian urea positif. Tempoh untuk memerhatikan keputusan adalah berkadar terus dengan jumlah mikroorganisma yang ada sekarang.

Seperti yang dapat dilihat, ia adalah kaedah mudah untuk diagnosis Helicobacter pylori dalam biopsi lambung.

Akhirnya, ujian ini juga berguna untuk membezakan spesies generik Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus dan Mycobacteria.

Menyemai ujian urea

Kedua-dua kaedah memerlukan inokulum mikroba yang kuat untuk mengoptimumkan hasilnya. Koloni bakteria sebaiknya diambil dari agar darah dan Sabouraud agar ragi, dengan beberapa pengecualian. Inokulum itu diemulsi dalam medium cecair.

Untuk kaldu urea Stuart diinkubasi pada 37 ° C selama 24 hingga 48 jam, mengetahui bahawa seseorang hanya mencari jenis genus Proteus apabila terikannya bakteria. Untuk ragi ia boleh diinkubasi pada suhu 37 ° C atau pada suhu bilik selama 24 hingga 48 jam inkubasi.

Dalam kes Christensen urea sup, masak di 37 ° C selama 24 jam. Sekiranya ujian itu negatif, ia boleh diinkubasi sehingga 6 hari. Jika ujian positif sebelum 6 jam, ia menunjukkan bahawa ia adalah ketegangan genus Proteus.

Dalam kes Christensen urea agar, bevel agar yang kuat disuntik, tanpa menusuk. Kaldu diinkubasi dan ditafsirkan dengan cara yang sama.

Kawalan kualiti

Strain kawalan boleh digunakan untuk menguji medium, seperti Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 dan Salmonella typhimurium.  Yang pertama mesti memberikan hasil yang positif dan dua keputusan negatif yang terakhir.

Rujukan

  1. Pérez C, Goitia K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Penggunaan sup urea Stuart untuk ujian urease, sebagai ujian dalam diagnosis yis. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Boleh didapati di: Scielo.org.
  2. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Makmal Britania. Christensen Medio (pangkalan ubi bumi) 2015. Boleh didapati di: britanialab.com