Foundation suprathionate, penyediaan dan kegunaan



The sup tetrilat atau kuah TT adalah medium budaya cair terpilih untuk pengayaan dan pemulihan ketegangan Salmonella. Ia dicipta oleh Müeller dan kemudian diubah suai oleh Kauffmann, sebab itu ada orang-orang yang menyebutnya sup Müeller-Kauffmann.

Medium yang asli mengandung proteose peptones, kalsium karbonat dan natrium thiosulfat. Kauffmann menambah garam hempedu dan mewujudkan modaliti yang lain dengan hijau terang. Bahan-bahan ini menghalang pertumbuhan koliform, meninggalkan medium bebas untuk perkembangan bakteria patogen, dalam hal ini Salmonella.

Pengubahsuaian ini sangat berjaya kerana ia meningkatkan sensitiviti medium dengan ketara. Oleh itu, ia pada masa ini berguna untuk mencari Salmonellas dalam apa-apa jenis sampel, tetapi terutamanya untuk najis dan cecair padat dan makanan..

Penyediaannya terdiri daripada dua fasa; medium komersial adalah asas untuk menyediakan sup tetrathionate, dan seterusnya untuk tetrathionate yang akan dibentuk, penyelesaian iodin iodin ditambah untuk melengkapkan medium.

Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) mengesyorkan penggunaan kaldu tethionate ditambah dengan hijau terang untuk pengayaan sampel untuk mencari Salmonella, kerana ia lebih selektif daripada sup tetrathionate dan sup selenite.

Secara umum, sup tetrathionate sangat sesuai apabila bakteria daripada genus Salmonella disyaki dalam kuantiti yang kecil atau yang disalahgunakan oleh pendedahan kepada bahan-bahan menghambat atau oleh proses perindustrian yang meminimumkan daya tahan mereka.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
    • 2.1 - Tetrathionate
    • 2.2 -Variante sup tetrathionate dengan hijau terang
  • 3 Gunakan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Cadangan
  • 6 Rujukan

Yayasan

Peptones sekarang sesuai dengan pencernaan pankin kasein dan pencernaan peptik tisu haiwan. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen dan nutrien secara amnya untuk pertumbuhan bakteria.

Untuk bahagiannya, natrium thiosulfate bertindak balas dengan larutan iodinated untuk membentuk tetrathionate. Ini menghalang pertumbuhan koliform dan nikmat perkembangan bakteria yang mengandungi enzim tetrathionate reductase, di antaranya adalah genus Salmonella, tetapi juga Proteus.

Garam hempedu juga bertindak sebagai bahan larangan kebanyakan bakteria Gram-positif dan beberapa bakteria Gram-negatif (koliform).

Kalsium karbonat menyerap bahan-bahan toksik yang dihasilkan oleh penguraian tetrathionate, yang membentuk asid sulfurik. Dalam pengertian ini, kalsium karbonat meneutralkan keasidan yang mengekalkan pH dalam medium stabil.

Dalam hal modaliti hijau yang cerah, bahan ini meningkatkan kuasa terpilih kaldu tetrathionate dengan menghalang mikroorganisme lain selain Salmonella genus..

Persediaan

-Sup terhidrat

Penyelesaian iodin iodin

Timbang:

  • 6 gr iodin.
  • 5 gr kalium iodida.

Iodida kalium dibubarkan dalam kira-kira 5 ml air suling steril, maka yodium ditambah sedikit demi sedikit sementara campuran dipanaskan. Selepas ia dibubarkan sepenuhnya ia diisi dengan air suling steril sehingga ia mencapai jumlah akhir sebanyak 20 ml.

Separuh asas untuk sup tetrathionate

Timbang seberat 46 gram media dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling steril. Campurkan dan panas sehingga larut sepenuhnya, ia boleh mendidih selama beberapa minit. Jangan sembah di autoclave. Asas medium dibenarkan untuk menyejukkan kira-kira 45 ° C dan pada masa itu 20 ml larutan iodinated ditambah..

Selepas menambah penyelesaian iodurada ke medium hendaklah digunakan dengan serta-merta. Jika anda tidak mahu menggunakan keseluruhan campuran, teruskan seperti berikut:

10 ml medium asas diedarkan dalam tiub, dan hanya 0.2 ml larutan iodin yang ditambahkan kepada mereka yang akan disuntik dengan sampel..

Mereka yang tidak akan digunakan masih boleh disimpan dalam peti sejuk, bagaimanapun, kerana medium tidak disterilkan, idealnya adalah untuk menyediakan jumlah yang diperlukan..

Warna medium sebelum menambah larutan iodin iodin adalah putih susu dengan mendakan putih dan selepas menambah ia berwarna coklat dengan mendakan padat. Endapan yang diperhatikan adalah normal dan bersesuaian dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir medium ialah 8.4 ± 0.2.

-Varian dair Tetrathionate dengan hijau terang

Untuk menyediakan kaldu tetrathionate dengan hijau terang semua langkah yang diterangkan di atas dijalankan, tetapi tambahan 10 ml penyelesaian hijau terang yang disediakan pada 0.1% akan ditambah ke campuran..

Hijau terang

Penyelesaian ini disediakan seperti berikut:

Timbang 0.1 g hijau terang dan laraskan 100 ml air suling. Panaskan sehingga mendidih untuk mencapai jumlah pembubarannya. Simpan dalam botol amber.

Guna

Untuk sampel tinja (budaya bangku) protokol adalah seperti berikut:

Inokulasi 1 g kotoran pepejal atau 1 ml najis cecair di dalam tiub dengan 10 ml sup karat tetrathionate siap sedia. Goncang bersungguh-sungguh dan terinkub di aerobiosis pada 43 ° C selama 6-24 jam.

Selepas itu, ambil aliquot 10 hingga 20 μl daripada sup dan subkultur dalam selektif medium untuk Salmonella, seperti SS agar, XLD agar, agar hijau terang, agar agar Hektoen enteric, antara lain..

Secara selari, media selektif untuk Salmonella harus disuntik dengan sampel langsung (najis) tanpa pengayaan. Untuk sampel swab rektum, muat turun bahan yang dikumpulkan di dalam tiub dan meneruskan seperti yang diterangkan di atas.

Untuk sampel makanan berat 10 g makanan pepejal atau 10 ml makanan cair dan inokulasi botol dengan 100 ml sedia untuk menggunakan tetrathionate broth. Teruskan dengan cara yang sama seperti yang diterangkan di atas tetapi diinkubasi pada suhu 37 ° C.

Seperti yang dapat dilihat, hubungan antara sampel dan sup akan sentiasa menjadi 1:10.

Kawalan kualiti

Untuk menguji medium budaya, strain kawalan yang diketahui boleh digunakan. Yang paling biasa digunakan ialah strain ATCC yang diperakui.

Strain yang akan digunakan ialah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Untuk Salmonella strain jangkaan pembangunan yang sangat baik, sementara Escherichia coli mungkin mempunyai perkembangan yang lemah atau biasa, dan Gram positif strain (Enterococcus dan Staphylococcus) sebahagiannya atau sepenuhnya menghalang.

Cadangan

-Oleh kerana medium ini tidak menghambat pertumbuhan Proteus, beberapa makmal menggunakan 40 mg / L novobiocin untuk mencegah perkembangan strain mikrob ini. Antibiotik perlu ditambah sebelum penyelesaian iodin iodin.

-Selepas menyediakan medium termasuk penyelesaian iodin iodin, ia tidak boleh melebihi 2 jam selepas inokulasi.

-Pada masa mengedarkan medium di dalam tiub, campuran mestilah dihomogenkan secara berterusan untuk menampung semula mendakan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang tercemar, sup tetrathionate diinkubasi pada 35-37 ° C, dan dalam sampel yang sangat tercemar, inkubasi pada 43 ° C adalah disyorkan..

Rujukan

  1. Makmal Condong Pronadisa. 2010. Serbuk tetrathionate base mengikut Müeller-Kauffmann. Terdapat dalam:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate Broth Base. Terdapat dalam:
  3. Makmal Britania. 2015. Tebal tepung berasaskan. Terdapat dalam:
  4. Media BBL. 2005. Penyediaan tiub untuk penanaman spesies Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Hidup-Rosel M, Perancis-Monsreal J. Perbandingan media budaya natrium selenite dan natrium tetrathionate, dieram pada kedua-dua 37 ° C dan 42 ° C untuk pengasingan Salmonella spp daripada najis pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220