Yayasan soya, penyediaan dan penggunaan triptisase soya



The soy soup tripticaseína Ia adalah medium budaya cecair, sangat berkhasiat dan tidak selektif. Oleh kerana fleksibiliti yang hebat, ia adalah salah satu media kultur cecair yang paling banyak digunakan dalam makmal mikrobiologi.

Ia juga dikenali sebagai soya soup tripticasa atau dicampur dengan kasein-soya, yang singkatannya TSB untuk akronimnya dalam bahasa Inggeris Tryptic saya Broth atau CST untuk akronim dalam bahasa Sepanyol. Kegunaannya sangat berbeza kerana komposisinya. Ia terdiri daripada triptein, soya peptone, natrium klorida, fosfat dipotassium dan glukosa.

Ia mampu mereproduksi bakteria patogenik penting klinikal, termasuk yang menuntut nutrisi dan bakteria anaerob. Sesetengah kulat dan kontaminan oportunistik juga boleh berkembang dalam persekitaran ini.

Oleh kerana daya pemakanan yang tinggi, ia mempunyai sensitiviti tinggi untuk mengesan pencemaran mikroba, oleh sebab itu ia telah dipilih oleh Perkhidmatan Pemeriksaan Haiwan dan Loji USDA untuk analisis mikrobiologi vaksin..

Begitu juga sup soya triptikase memenuhi keperluan farmakopoeias yang berbeza (EP Eropah, JP Jepun dan Amerika Utara USP) untuk kajian mikrobiologi produk di peringkat perindustrian, seperti kosmetik dan makanan.

Sebaliknya, adalah penting untuk menyebut bahawa walaupun utiliti yang hebat medium ini agak murah, maka ia adalah berpatutan untuk kebanyakan makmal mikrobiologi. Ia juga sangat mudah untuk disediakan.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
    • 2.1 kacang soya Trypticamine
    • 2.2-Pelbagai sup serama triptikasein
  • 3 Gunakan
  • 4 dibiakkan
  • 5 Kawalan kualiti
  • 6 Batasan
  • 7 Rujukan

Yayasan

Tripti, peptone dan glukosa memberikannya sifat-sifat berkhasiat penting untuk mengubahnya menjadi medium yang sesuai untuk pembangunan mikrob yang cepat.

Kira-kira 6 hingga 8 jam inkubasi sudah dapat dilihat pertumbuhan kebanyakan mikroorganisma. Walau bagaimanapun, terdapat ketumbuhan yang lambat yang boleh bertahan untuk beberapa hari.

Natrium klorida dan fosfat dipotassium bertindak sebagai keseimbangan osmosis dan pengawal selia pH. Kehadiran pertumbuhan dibuktikan dengan penampilan kekeruhan dalam medium; jika tidak ada pertumbuhan, media kekal menjadi lut.

Oleh kerana warna cahayanya adalah mungkin untuk memerhatikan pengeluaran pigmen, seperti yang ditunjukkan dalam gambar yang terletak pada awal artikel, yang sesuai dengan pigmen yang dihasilkan oleh Pseudomonas aeruginosa. 

Persediaan

-Sup kacang soya Tryptic

Untuk menyediakan sup soy soya triptikase, timbang 30 gram medium komersial kering dalam skala digital. Kemudian ia larut dalam satu liter air suling yang terkandung dalam fiola.

Campuran dibenarkan untuk berdiri selama 5 minit dan kemudian dibawa ke sumber panas untuk membantu pembubaran medium. Ia perlu digoncang dengan kerap semasa mendidih selama 1 minit.

Apabila dibubarkan ia diagihkan dalam tiub saiz sesuai yang diperlukan. Tiub dengan palam kapas atau bakelite caps boleh digunakan. Selepas itu, tiub disterilkan dengan medium dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

PH medium hendaklah 7.3 ± 0.2

Perlu diambil perhatian bahawa warna medium kultur kering adalah cahaya kuning dan harus disimpan pada 10 hingga 35 ° C, di tempat yang kering. Walaupun sup itu disediakan adalah ambar ringan dan harus disimpan dalam peti sejuk (2 hingga 8 ° C).

-Variasi sup soya tripticasein

Trypticamine soup soya yang diubah suai boleh disediakan dengan menambah garam hempedu dan novobiocin untuk menjadikannya selektif untuk pengasingan E. coli. Satu lagi pilihan untuk tujuan yang sama adalah untuk menyediakan sup soy soya triptikase ditambah vancomycin, cefixime dan tellurite (2.5 μg / ml).

Sebaliknya, lebih banyak glukosa (0.25%) boleh ditambah kepada supper soya trypticasein apabila tujuannya adalah untuk merangsang pembentukan biofilm.

Guna

Ia cukup berkhasiat untuk membolehkan pertumbuhan bakteria menuntut atau menjengkelkan seperti Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp dan Brucella sp, tidak perlu ditambah dengan darah atau serum.

Begitu juga, beberapa kulat boleh berkembang di dalam sup ini, seperti Candida albicans kompleks, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Di samping itu, medium ini di bawah keadaan anaerobik adalah sesuai untuk memulihkan bakteria milik genus Clostridium, serta bakteria anaerob yang tidak terlepas dari kepentingan klinikal..

Jika ditambah 6.5% natrium klorida boleh digunakan untuk pertumbuhan Enterococcus dan lain-lain Kumpulan D Streptococcus.

Di peringkat penyelidikan, ia sangat berguna dalam pelbagai protokol, terutamanya dalam kajian bakteria yang membentuk biofilm atau biofilm. Ia juga digunakan untuk menyediakan penggantungan bakteria pada 0.5% daripada Mac Farland yang diperlukan untuk melakukan antibiogram dengan kaedah Kirby dan Bauer.

Dalam kes ini, 3 hingga 5 koloni penampilan yang sama diambil dan diemulsifikasi dalam kalsium soya trypticasein 4-5 ml. Kemudian diinkubasi selama 2 hingga 6 jam pada 35-37 ° C dan seterusnya disesuaikan dengan kepekatan yang dikehendaki menggunakan salin steril. Kaldu soya trypticase tidak boleh digunakan selama 18 hingga 24 jam inkubasi.

Sown

Sampel boleh disemai secara langsung atau koloni tulen subkultur yang diambil dari media selektif. Inokulum mestilah kecil supaya tidak mendidih medium sebelum inkubasi.

Biasanya inkubates pada 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam, tetapi keadaan ini boleh berubah-ubah bergantung pada mikroorganisma yang dicari. Ia juga boleh diinkubasi dalam keadaan anaerobik pada suhu 37 ° C selama beberapa hari jika perlu. Contohnya, dalam mikroorganisma menuntut atau lambat boleh diinkubasi sehingga 7 hari.

Dalam analisis mikrobiologi bahan-bahan farmaseis sama seperti vaksin-protokol yang lebih ketat. Dalam kes ini, sup tanpa pertumbuhan tidak dibuang sehingga mencapai 14 hari pengeraman berterusan.

Kawalan kualiti

Untuk setiap kumpulan disediakan, 1 atau 2 tiub harus diinkubasi tanpa inokulasi untuk menunjukkan kemandulan. Ia mesti kekal tidak berubah.

Anda juga boleh menanam strain yang dikenali untuk menilai tingkah laku mereka. Antara jenis yang boleh digunakan ialah:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 atau 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kes, pertumbuhan mesti memuaskan di bawah keadaan atmosfera dan suhu yang sesuai untuk setiap mikroorganisma.

Had

-Penapaian glukosa menyebabkan penurunan pH medium oleh pengeluaran asid. Ini mungkin tidak menguntungkan bagi kelangsungan mikroorganisma yang sensitif terhadap keasidan.

-Ia tidak disyorkan untuk penyelenggaraan strain, kerana sebagai tambahan kepada keasidan, bakteria selepas beberapa hari memecah nutrien dengan pengumpulan akumulasi bahan-bahan toksik yang membuat persekitaran tidak ramah.

-Penjagaan mesti diambil dalam penjagaan semua protin kemandulan, kerana broths mudah tercemar.

-Selepas penyediaan sup soya tripticasein jangan cuba memindahkan sup kepada tiub steril yang lain, kerana jenis manuver ini sangat terdedah kepada pencemaran.

Rujukan

  1. Cona E. Syarat untuk kajian kerentanan yang baik dengan ujian penyebaran agar. Pdt. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Boleh didapati di: scielo.org
  2. Makmal British Soya soup tryteine. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  3. Makmal MCD. Kacang soya trytica. Boleh didapati di: elektronik-systems.com
  4. Makmal Neogen. Triplex Broth Soya. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluasi teknik imunoseparasi magnetik untuk pemulihan Escherichia coli O157: H7 dalam krim susu. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Boleh didapati di: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchan K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Pembentukan Biofilm Finol M. yang terpencil Staphylococcus aureus menurut kerentanan antimikrobial dan klinikal. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Boleh didapati di: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Pengasingan Escherichia coli O157: H7 di Sampah Lembu Lembu Lembu Tujuan Dua dari Perbandaran Miranda, Zulia State, Venezuela. Wahai Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Boleh didapati di: scielo.org