Ciri-ciri dan penyediaan bakteria bakteria
The bakteria bakteria adalah lanjutan dalam bentuk filem nipis penggantungan mikroorganisma bakteria yang dilakukan pada plat kaca atau slaid telus, untuk pemerhatian di bawah mikroskop optik.
Pelanjutan dalam bentuk filem dijalankan untuk memisahkan mikroorganisma sebanyak mungkin, kerana jika mereka dikelompokkan pemerhatian tidak jelas.
Dalam kajian teknik kultur bakteria penyediaan smear, penetapan dan pewarnaan digunakan untuk menganalisisnya lebih baik. Oleh kerana saiz mikroorganisma yang kecil, penggunaan mikroskop optik diperlukan untuk pemerhatiannya.
Mikroskop optik adalah instrumen yang sangat diperlukan untuk pemerhatian smear. Ini menggunakan kanta optik dan cahaya yang membolehkan visualisasi sampel dengan peningkatan saiz yang besar.
Secara umumnya, sel hidup tidak mempunyai struktur yang kebanyakannya berwarna, dilihat melalui mikroskop optik yang mereka tidak berwarna, sampel telus, dan menunjukkan kontras dalaman yang sedikit dan dengan persekitaran mereka.
Pemerhatian dengan mikroskop medan cahaya mudah, tanpa penggunaan teknik pewarnaan tambahan, sangat terhad dan hanya digunakan dalam beberapa kes, seperti dalam pemerhatian pergerakan mikroorganisma.
Untuk memerhatikan mikroorganisma secara optimum, keseimbangan antara kontras dan resolusi mesti dicapai. Butiran sel tidak dapat diperhatikan di bawah mikroskop, walaupun pada resolusi tinggi; Penggunaan pewarna diperlukan melalui teknik pewarnaan, yang memberikan kontras untuk pemerhatian.
Indeks
- 1 Ciri-ciri bakteria bakteria berkualiti tinggi
- 1.1 Perbezaan yang sangat baik
- 1.2 Betulkan yang baik
- 1.3 Pewarnaan yang baik
- 2 Persediaan
- 2.1 A. Frotis
- 2.2 B. Penetapan
- 2.3 C. Pewarnaan mudah
- 2.4 D. Pemeliharaan definitif tiub
- 3 Rujukan
Ciri-ciri bakteria bakteria berkualiti tinggi
Kontras yang sangat baik
Untuk mencapai kontras yang cemerlang terdapat mikroskop canggih yang dipanggil mikroskop kontras fasa, gangguan berbeza dan mikroskop medan gelap. Jenis mikroskop ini digunakan untuk memerhatikan struktur bakteria seperti sarung dan filamen, antara lain.
Pewarnaan adalah teknik mudah untuk meningkatkan kontras yang dicapai dengan mikroskop medan yang jelas. Dalam teknik ini, pewarna yang berlainan boleh digunakan yang menampakkan peningkatan pemerhatian di bawah mikroskop.
Noda dibuat secara langsung pada smear atau sambungan suspensi mikroorganisma pada slaid, sebelum kering dan tetap.
Betulkan baik
Fiksasi adalah teknik yang digunakan untuk mengekalkan struktur selular; menyebabkan ketidakaktifan mikroorganisma dan melekat pada kaca slaid. Terdapat rawatan penetapan yang berbeza: penetapan haba dan penetapan bahan kimia.
Penetapan haba
Ini adalah kaedah yang paling digunakan dalam pemerhatian bakteria bakteria. Teknik ini terdiri daripada lulus penggantungan bakteria bakar oleh api yang lebih ringan. Teknik ini dapat memelihara morfologi luaran bakteria, tetapi menghancurkan struktur dalamannya.
Penetapan kimia
Penetapan kimia menggunakan bahan kimia dalam pemeliharaan, seperti formaldehid atau formaldehid, etanol dan asid asetik, antara lain. Kelebihan menggunakan agen pembetulan kimia ialah pemeliharaan struktur selular dalaman mikroorganisma dicapai.
Pewarnaan yang baik
Prosedur yang paling biasa untuk mengotorkan pori-pori sebelumnya yang kering dan tetap adalah pewarnaan positif atau mudah, pewarnaan pembeza dan pewarnaan negatif. Terdapat juga teknik khas untuk mengotorkan struktur sel tertentu (kapsul, spora, flagella).
Pewarnaan yang positif atau pewarnaan yang mudah
Pewarnaan positif atau sederhana adalah teknik smear noda yang paling banyak digunakan. Menggunakan pewarna yang mempunyai keupayaan untuk mengikat struktur mikrob tertentu, membolehkan mereka diperhatikan di bawah mikroskop.
Pewarna ini mempunyai kumpulan kromoforik (bahagian berwarna) dalam struktur kimia mereka, dengan ikatan bergantian berganda dan ikatan mudah (konjugasi). Ikatan ini boleh membentuk ikatan ionik atau kovalen dengan beberapa struktur selular.
Pewarna yang digunakan dalam pewarnaan yang positif atau mudah kebanyakannya adalah derivatif kimia aniline (garam organik berwarna).
Sebaliknya, di kalangan pewarna kita boleh mencari beberapa dengan pH asas dan yang lain dengan pH asid.
Pewarna asas
Dalam pewarna asas, kumpulan kromofor mempunyai caj elektrik yang positif. Sebagian besar mikroorganisme prokariotik mempunyai pH dalaman yang neutral, dan permukaan sel mereka dikenakan caj negatif. Melalui interaksi elektrostatik ini, kromofor mengikat sel dan pewarna.
Contoh-contoh pewarna asas adalah metilena biru, kristal ungu, hijau malachite, fuscin asas, safranin, antara lain.
Pewarna asid
Dalam pewarna asid kumpulan kromofor mempunyai caj elektrik negatif. Ini digunakan untuk mengotorkan protein dengan kumpulan amino bermuatan positif. Contoh-contoh pewarna asid adalah fuscin asid, meningkat Bengal, Congo merah dan eosin.
Dendam pembezaan
Teknik pewarnaan pembeza terdiri daripada dua pewarna warna atau intensiti yang berlainan, untuk membezakan mikroorganisma yang berlainan di bawah mikroskop. Gram stain dan pewarnaan asid-alkohol adalah kesan pembezaan yang paling banyak digunakan dalam bakteriologi.
Noda Gram digunakan sebagai ujian awal untuk mengetahui bentuk, saiz, kumpulan sel, sebagai tambahan kepada jenis dinding sel. Melalui ujian Noda Gram, bakteria dengan dinding sel dikelaskan sebagai bakteria Gram-positif dan bakteria Gram-negatif.
Pewarnaan negatif
Dalam teknik ini, pewarna kimia digunakan yang tidak menembusi sel-sel dalaman, tetapi mereka melakukan medium di mana mikroorganisma muncul sebagai latar belakang hitam.
Dalam teknik pewarnaan negatif, pewarnaan dibuat dengan setitik penggantungan dakwat Cina atau nigrosin, yang selepas membenarkan pengeringan pada suhu bilik membentuk legap filem ke arah cahaya. Dengan cara ini, mikroorganisma diperhatikan sebagai bentuk terang pada latar belakang gelap.
Persediaan
A. Smear
1.- Basuh slaid dengan sangat baik, keringkan dengan kertas penyerap dan labelkannya. Label mesti menunjukkan kandungan penyediaan, tarikh dan nama orang yang memprosesnya.
2.- Cahaya yang lebih ringan dan sterilkan gelung inokulasi dalam api sehingga merah panas.
3.- Biarkan pemegangnya sejuk.
4.- Ambil tiub kultur bakteria, keluarkan topi dan cepat lulus mulut tiub berhampiran api yang lebih ringan (api).
5.- Memperkenalkan gelung inokulasi di dalam tiub yang mengandungi kultur bakteria dan mengambil sampel.
6.- Jika budaya dalam medium cair, letakkan sampel yang diambil dengan pemegang di tengah slaid dan biarkannya dengan teliti dalam lingkaran kira-kira 2 cm diameter.
7.- Rebis semula gelung inokulasi.
8.- Izinkan pengeringan smear di udara.
9.- Ulangi langkah 3 hingga 8 tiga kali.
10.- Jika budaya dalam medium yang padat, setitik air suling harus diletakkan sebelumnya pada slaid. Ini dilakukan untuk menggabungkan sampel kecil budaya yang diambil dengan mengendalikan inokulasi, mengikut tanda-tanda langkah 2 hingga 5 (keadaan asepsis).
11.- Perluas sampel yang dicairkan dengan air jatuh pada slaid dan ulangi tiga kali.
B. Penetapan
1.- Tambah pada smear kering -produced dari budaya dalam medium cecair, dua titisan metanol atau etanol mutlak.
2.- Izinkan pengeringan di udara dari ringan.
3.- Jika bengkak berasal dari budaya dalam padat, pepejal kering tetap dengan panas, lulus 2 hingga 3 kali dengan cepat melalui kawasan paling panas dari api yang lebih ringan.
4.- Sentuh bahagian bawah selaput dengan bahagian punggung tangan kiri (untuk tangan kanan, gunakan tangan kanan) dan pastikan ia sejuk.
C. Pewarnaan mudah
1.- Tambah 2 titik pewarna yang dipilih ke dalam smear dan biarkan ia bertindak untuk masa yang diperlukan dalam protokol khusus setiap pewarna (biasanya antara 1 hingga 5 minit).
2.- Sesetengah pewarna memerlukan penggunaan haba untuk pengaktifan mereka, yang mana perlu untuk berhati-hati apabila memanaskan slaid dalam api yang lebih ringan (memanipulasi dengan pinset dan mengelakkan mendidih). Overheating daripada smear boleh memusnahkan sel-sel yang anda ingin amati.
3.- Keluarkan pewarna yang berlebihan dengan membasuh dengan air suling dari sebatang picet. Keluarkan air basuh dengan perlahan mengetik slaid di pinggirnya, condong ke meja kerja.
4.- Benarkan pengeringan udara.
5.- Bergantung kepada jenis pemerhatian, coverlip digunakan atau tidak di peringkat ini. Coverlip melindungi dan memelihara smear tersebut. Sekiranya pemerhatian dilakukan dengan rendaman dalam minyak pada tahap ini, tiada coverlip digunakan tetapi smear tidak boleh dipelihara.
D. Pemeliharaan definitif tiub
1.- Merendam smear berturut-turut dalam setiap penyelesaian yang dinyatakan di bawah, untuk sekurang-kurangnya 5 minit. Tujuan "mandi" ini adalah untuk meninggalkan cecair sepenuhnya kering. Setiap reagen mesti dikeringkan, sebelum memperkenalkan pernafasan pada mandi seterusnya.
Perintah mandian yang menghidrat adalah seperti berikut:
- Ethanol 70%
- 95% etanol
- Aseton tulen
- Campurkan aseton-xylol 1: 1
- Xilol
Kemudian biarkan pengeringan udara.
2.- Pasang coverlip, sebaik-baiknya 22 × 22 mm, menggunakan balsam Kanada atau cara perhimpunan lain.
Rujukan
- Briggs, G. (1965). Faktor Penyebab Kemalangan dan Jangkitan Makmal Mikrobiologi. Makmal Biologi Tentera AS. Fort Detrick.
- Cappucino, J.G. dan Welch, C.T. (2017). Mikrobiologi: Manual Makmal. Pearson.
- Holt, J.G. Editor (1977). Panduan Bergey Bacteriologi Determinatif yang lebih pendek. 8th Baltimore: Williams dan Wilkins Co.
- Johnson, T.R. dan kes; C.L. (2018). Eksperimen Makmal Mikrobiologi. Pearson.
- Tille, P. (2017). Mikrobiologi Diagnostik. 14th St Louis, Amerika Syarikat: Elsiever, Inc.