Asas MIO, penyediaan dan kegunaan



The separuh MIO adalah ujian biokimia yang digunakan untuk membantu mengenal pasti spesies bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae. Ia cukup berkhasiat dan terdiri daripada glukosa, ekstrak yis, peptone, triptein, L-ornithine hydrochloride, bromocresol ungu dan agar.

Makna akronimnya (MIO) menerangkan setiap parameter yang dapat diperhatikan dalam medium ini; motilitas, indole dan ornithine. Motilitas adalah keupayaan mikroorganisma untuk bergerak dengan kehadiran flagella. Agar harta ini dapat dipatuhi, konsistensi medium mestilah separa pepejal, jadi penyediaan mempunyai jumlah sedikit agar..

Pengeluaran indole membuktikan kehadiran enzim tryptophanase yang bertindak ke atas asma amino tryptophan, yang diperlukan penggunaan reagen yang mendedahkan untuk menjadikan pengeluaran indole kelihatan.

Akhirnya, ornithine menentukan jika bakteria mampu decarboxylating asid amino, iaitu, jika ia mempunyai enzim orinithine decarboxylase.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Peptone, ekstrak yis dan triptein
    • 1.2 Motivasi
    • 1.3 Glukosa
    • 1.4 L-Ornithine
    • Penunjuk 1.5 pH
  • 2 Pembenihan dan teknik pembangunan
  • 3 Persediaan
    • 3.1 MIO Medium
    • 3.2 Reaktor Kovacs (pemaju ujian Indole)
  • 4 Gunakan
  • 5 Kawalan kualiti
  • 6 Rujukan

Yayasan

Peptone, ekstrak yis dan triptein

Unsur-unsur ini menyumbang kepada daya pemakanan media ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrien dan asid amino penting untuk pembangunan bakteria.

Selain itu, triptein merupakan sumber tryptophan untuk membuktikan kehadiran enzim tryptophanase, yang merendahkan tryptophan oleh deaminasi reduktif yang melepaskan indole, asid piruvat, ammonia dan tenaga.

Indole tidak berwarna, jadi kehadirannya diturunkan dengan menambahkan lima titisan reagen Ehrlich atau Kovacs, baik dengan p-dimetilaminobenzaldehida.

Kumpulan aldehid dari sebatian ini bertindak balas dengan indole, menghasilkan produk fuchsia-merah berbentuk cincin pada permukaan agar.

Sebarang warna hendaklah dianggap sebagai bukti positif. Ujian harus dibaca dengan serta-merta, kerana sesetengah warna merendahkan.

Sebaliknya, ujian ini harus dinyatakan setelah mencatat hasil motilitas dan decarboxylation ornithine..

Tafsiran

Ujian positif: pembentukan cincin merah fuchsia apabila menambah reagen kovacs.

Ujian negatif: tiada pembentukan cincin.

Motivasi

Keupayaan bakteria untuk bergerak akan dibuktikan jika medium keruh diamati atau jika terdapat garis pertumbuhan yang tebal yang meluas di sekitar inokulasi awal.

Ujian motilitas negatif akan dibuktikan dengan memerhatikan garis pertumbuhan yang nipis, dan sekelilingnya akan tanpa pertumbuhan.

Adalah penting bahawa motilinya dibaca sebelum mendedahkan indole, kerana penambahan reagen itu mendatar seluruh media.

Dalam bakteria mudah alih tetapi lambat, sukar untuk menunjukkan motilitas mereka dengan medium ini. Dalam kes ini, disyorkan untuk menggunakan ujian atau kaedah lain, seperti medium motilitas atau kaedah drop drop.

Glukosa

Glukosa adalah karbohidrat yang boleh fermentasi yang di samping menyediakan tenaga menghasut medium, keadaan yang diperlukan untuk decarboxylation daripada ornitin asid amino untuk berlaku.

Penapaian glukosa perlu selalu berlaku, berdasarkan prinsip bahawa semua bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae fermentasi glukosa.

L-Ornithine

Jika bakteria menghasilkan enzim decarboxylase ornithine, ia boleh bertindak sebaik sahaja medium telah diasur oleh penapaian glukosa.

Enzim decarboxylase ornithine bertindak pada kumpulan karboksil daripada asid amino menghasilkan amina yang dipanggil putresine yang alkalizes medium lagi.

Ujian ini harus dibaca selepas 24 jam inkubasi, kerana jika anda cuba membaca sebelum anda boleh salah menafsirkan ujian dengan negatif palsu.

Perlu diingat bahawa tindak balas pertama yang berlaku ialah penapaian glukosa, supaya medium menjadi kuning dalam fasa awal (pertama 10 hingga 12 jam). Sekiranya decarboxylation ornithine berlaku kemudian, medium akan berubah menjadi ungu.

Adalah penting untuk mentafsirkan ujian decarboxylation ornithine sebelum mendedahkan indole, kerana penambahan reagen Kovacs mengubah warna medium.

Tafsiran

Ujian negatif: kuning sederhana atau dengan latar belakang kuning.

Ujian positif: benar-benar ungu.

Penunjuk PH

Dalam kes ini bromocresol ungu digunakan; orang yang bertanggungjawab mendedahkan apabila terdapat perubahan pH di tengah. Apabila dihidu, penunjuk menjadi kuning, dan apabila alkali bertukar menjadi ungu.

Teknik benih dan pembangunan

Untuk menanam media MIO, gelung lurus atau jarum digunakan dan dengannya sebahagian koloni yang akan dipelajari dikumpulkan..

Pecatan yang mendalam dibuat dalam medium MIO dalam garis lurus. Ia tidak digalakkan untuk melakukan punca ganda, kerana ia boleh memberikan imej motif yang salah sekiranya punctures tidak dilakukan di tempat yang sama.

Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Perhatikan keputusan dalam susunan ini: motilitas, decarboxylation of ornithine dan akhirnya mendedahkan indole.

Ia adalah dinasihatkan untuk membuang secara aseptik 2 ml sederhana, mengundurkan kepada tiub steril dan melaksanakan terdapat ujian indole, supaya jika ia memberi negatif boleh mengeram sepanjang tiub asal untuk 24 jam, sekali lagi untuk mendedahkan indole.

Pengembangan indole dilakukan dengan cara berikut: 3 hingga 5 tetes reagen Kovacs ditambahkan ke medium MIO dan diaduk dengan kuat. Ia diperhatikan jika gelang merah fuchsia muncul atau tidak.

Persediaan

Separuh MIO

Berat 31 gr medium MIO dan larut dalam satu liter air sulingan.

Panaskan sehingga campurannya selama satu minit, kacau sehingga kerap dibubarkan sepenuhnya. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan ia berdiri lurus dalam rak, sedemikian rupa sehingga blok separa pepejal terbentuk.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C Biarkan tenggelam sebelum menanam ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan medium yang disediakan sedikit berlapis ungu.

PH akhir medium disediakan ialah 6.5 ± 0.2

Medium ini menjadi kuning dengan pH berasid dan berwarna ungu pada pH alkali.

Reagen Kovacs (pemaju ujian Indole)

Reagen ini disediakan seperti berikut:

150 ml amil, isoamil atau butil alkohol (mana-mana tiga) diukur. Di dalamnya 10 g p-dimetilaminobenzaldehid dibubarkan. Selepas itu 50 ml asid hidroklorik pekat ditambah perlahan.

Reagen yang disediakan tidak berwarna atau berwarna kuning. Ia perlu disimpan dalam botol ambar dan disimpan di dalam peti sejuk. Warna coklat gelap menunjukkan kemerosotannya.

Juga reagen Kovacs boleh digantikan oleh reagen Ehrlich. Yang terakhir ini, yang lebih sensitif, lebih disukai untuk mendedahkan indole dalam bakteria yang menghasilkan dalam kuantiti yang kecil, seperti dalam beberapa anaerobes bukan penapaian Gram riba negatif dan tertentu.

Guna

Media ini merupakan ujian yang melengkapi bateri ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae.

Data de-karboksilasi ornithine berfungsi untuk membezakan Shigella sonnei, yang memberikan positif, daripada Shigella boydii, Shigella flexneri dan S. dysenterieae, yang memberi negatif.

Ia juga membezakan genus Klebsiella, yang memberikan negatif, genus Enterobacter, di mana kebanyakan spesiesnya adalah positif.

Kawalan kualiti

Setiap kali satu kumpulan media MIO disediakan, ujian kawalan boleh dilakukan. Untuk ini, strain dikenali atau diperakui digunakan untuk memerhatikan kelakuan medium.

Strain yang boleh digunakan adalah Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes dan Proteus mirabilis.

Keputusan yang diharapkan adalah E. coli dan M. morganii. Dan M: +, I: + dan O: +.

Klebsiella pneumoniae memberikan semua negatif (M: -, saya: -, O :-). Proteus mirabilis dan Enterobacter aerogenes dan M: + I: - dan O: +.

Rujukan

  1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Makmal Britania. MIO Medio 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  5. BD Laboratories Motlot BBL Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Boleh didapati di: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motilitas, Indole, Ornithine. 2010. Boleh didapati di: andinamedica.com