Yayasan ujian, penyediaan dan penggunaan Voges-Proskauer



The Ujian Voges-Proskauer adalah ujian biokimia yang digunakan untuk membantu mengenal pasti bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae. Terutama ia berguna untuk membezakan strain Escherichia coli daripada Klebsiella dan Enterobacter, antara lain.

Ujian ini dilakukan dalam medium kultur cair yang disebut metil red-Voges Proskauer, lebih dikenali dengan singkatan RM / VP. Media ini terdiri daripada polypeptone buffered, glukosa, fosfat dipotassium dan air sulingan.

Medium RM / VP semasa adalah pengubahsuaian medium Clark dan Lubs, yang pada asalnya mengandungi kepekatan peptone dan glukosa yang lebih rendah. Oleh itu, kurang ion hidrogen dihasilkan, diperlukan untuk reaksi Voges-Proskauer positif.

Ujian ini berdasarkan keupayaan mikroorganisma untuk menggunakan glukosa melalui laluan butilena glikol, dan membentuk produk akhir neutral yang dipanggil acetoin, dengan kehadiran oksigen dan pH alkali.

Dalam medium RM / VP, selain dapat mendedahkan ujian Voges-Proskauer, ujian metil merah juga boleh didedahkan.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Asas ujian Voges-Proskauer
    • 1.2 Asas untuk pembangunan ujian dan tafsiran
  • 2 Persediaan
    • 2.1 RM / VP sederhana
    • 2.2 Voges Reagen A
    • 2.3 Voges B Reagen
  • 3 Prosedur ujian Voges-Proskauer
    • 3.1 Pembangunan ujian
  • 4 Gunakan
  • 5 Kawalan kualiti
  • 6 Rujukan

Yayasan

Asas ujian Voges-Proskauer

Pluripeptonas yang hadir dalam medium menyediakan keperluan pemakanan yang penting untuk pertumbuhan bakteria. Untuk bahagiannya, glukosa adalah sebatian utama. Banyak bakteria mempunyai keupayaan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asid piruvat.

Asid piruvat adalah titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari sana setiap mikroorganisma boleh mengambil laluan yang berbeza. Ada yang akan membentuk asid campuran, seperti asid laktik, asid asetik, asid formik dan asid succinic, dan yang lain akan membentuk produk neutral seperti 2,3-butanediol.

Ujian Voges-Proskauer mendedahkan keupayaan mikroorganisma untuk membentuk asetil methyl carbinol (acetoin), produk perantaraan 2,3-butanediol di bawah keadaan aerobik.

Acetoin dikurangkan dan membentuk 2,3-butanediol, tetapi reaksi ini boleh diterbalikkan, jadi jika 2,3-butanadiol dioksidakan, acetoin terbentuk. Oleh itu, oksigen adalah penting.

Fosfat dipotassium adalah penampan yang menghalang campuran pada pH sebanyak 6.9 ± 0.2..

Asas untuk perkembangan ujian dan tafsiran

Untuk menunjukkan tindak balas, satu perkembangan harus dilakukan menggunakan dua reagen (reaksi Barrit), yang dikenali sebagai Voges A dan Voges B.

Voges A adalah penyelesaian 5% α-naphthol, dan Voges B adalah 40% penyediaan kalium hidroksida. Sekiranya kalium hidroksida tidak tersedia, ia boleh digantikan dengan 40% natrium hidroksida.

Α-naphthol adalah pemangkin yang akan meningkatkan intensiti warna tindak balas, yang menjadikan ujian lebih sensitif. Α-naphthol mesti ditambah terlebih dahulu, mengaduk tiub agar medium menjadi bersentuhan dengan oksigen. Dengan cara ini, persembahan acetoin dioksidakan kepada diacetyl, dan 2,3-butanadiol dioksidakan untuk membentuk acetoin, lulus kepada diacetyl.

Ini adalah bagaimana α-naphthol akan mengikat diacetyl, yang seterusnya dikaitkan dengan nukleus guanidine yang terdapat dalam arginin asid amino, yang kemudiannya berasal dari pluripeptonas.

Untuk bahagiannya, potassium atau natrium hidroksida bertanggungjawab untuk menyerap CO2 dan bertindak balas dengan peptone. Reaksi ini menyebabkan pembentukan warna merah jambu-salmon, kelihatan jelas selepas menggegarkan tiub dengan sangat baik.

Untuk pewarnaan berlaku dengan serta-merta, jumlah betul diacetyl, peptone dan α-naphthol mestilah bercampur-campur. Jika ini tidak berlaku, biarkan tiub berehat selama 15 minit sebelum menafsirkannya.

Biasanya ujian positif selepas 2 hingga 5 minit, apabila warna merah jambu yang lemah dapat dilihat. Sekiranya dibiarkan berehat selama 30 minit hingga 1 jam keamatan warna akan maksimum (merah dalam).

Ujian negatif akan terbukti apabila sup adalah kuning. Selepas 1 jam, jika ujian adalah negatif, warna tembaga boleh dibentuk hasil daripada tindak balas kalium hidroksida pada α-naphthol.

Persediaan

RM / VP sederhana

Timbang 17 g medium kultur kering dan larut dalam satu liter air sulingan. Biarkan selama 5 minit. Panaskan sehingga mendidih untuk dibubarkan sepenuhnya. Hidangkan 3 hingga 4 ml dalam tiub dan sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Media kultur dehidrasi adalah kuning air dan medium disediakan adalah ambar ringan.

PH akhir medium ialah 6.9 ± 0.2.

Voges A Reagent

Timbang 5 g α-naphthol dan larut dalam 50 ml etil alkohol (mutlak). Selanjutnya terus menambah etil alkohol untuk membuat hingga 100 ml.

Reagent Voges B

Timbang 40 g kalium hidroksida dan larut dalam 50 ml air suling dalam bikar. Gelas itu harus diletakkan dalam mandi air sejuk untuk mengawal suhu, kerana pada saat melarutkan persiapan meningkat tajam.

Selepas penyelesaian sejuk, ia dipindahkan ke belon yang telah lulus dan dibawa sehingga 100 mL dengan air sulingan.

Prosedur ujian Voges-Proskauer

Untuk melaksanakan ujian Voges-Proskauer, sup ayam RM / VP disuntik dengan mikroorganisma di bawah kajian, dari budaya tulen 18 hingga 24 jam.

Inokulum tidak boleh terlalu tebal. Ia diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam, walaupun kadang-kadang pengeraman diperlukan selama beberapa hari. Cowan dan Steel percaya bahawa 5 hari adalah masa inkubasi minimum yang diperlukan untuk mengesan semua spesies Voges-Proskauer (VP) positif keluarga Enterobacteriaceae.

Pembangunan ujian

Pisahkan 1 mL aliquot dalam tiub dan lakukan perkembangan seperti berikut: tempatkan 12 titis (0.6 mL) Voges A reagent dan 4 tetes (0.2 mL) Voges B. Campurkan untuk aerate dan biarkan berdiri selama 5 - 10 minit sebelum melakukan. Walau bagaimanapun, jika ujian masih negatif biarkan ia berdiri dan perhatikan tiub selepas 30 minit hingga 1 jam.

Penampilan warna merah jambu menunjukkan bahawa reaksi Voges-Proskauer adalah positif. Jika medium kekal kuning, reaksi negatif.

Penambahan pemaju dalam susunan dan kuantiti yang ditunjukkan adalah penting untuk mengelakkan negatif palsu.

Guna

Ujian Voges-Proskauer berguna untuk membezakan antara jenis E. coli yang merupakan negatif VP, daripada Klebsiella genera, Enterobacter, Serratia, antara lain, yang positif VP.

Kawalan kualiti

Strain kawalan boleh digunakan untuk menguji kualiti medium yang disediakan. Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Keputusan yang diharapkan adalah tindak balas positif Voges-Proskauer sahaja K. pneumoniae dan E. cloacae. Selebihnya memberikan reaksi negatif.

Rujukan

  1. Makmal Britania. MR-VP Medium. 2015. Boleh didapati di: www.britanialab.com
  2. Makmal Microkit M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tersedia: http://www.medioscultivo.com
  3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.