Agar asas coklat, penggunaan dan penyediaan



The coklat agar ia adalah medium budaya pepejal, diperkaya, tidak selektif dan tidak berlainan. Ia digunakan terutamanya untuk pengasingan mikroorganisma yang menuntut dari sudut pemakanan pemakanan, walaupun ia boleh membesar apa-apa jenis bakteria.

Itulah sebabnya kegunaannya meningkat terutamanya dalam pembenihan sampel yang biasanya steril, seperti CSF dan cecair bersama. Walaupun ia juga termasuk dalam cara yang dipilih untuk menanam sampel polimikrobial, tetapi dalam kes-kes ini adalah perlu untuk menambah antibiotik yang menghalang flora bersamaan.

Medium ini mempunyai warna coklat yang sangat serupa dengan coklat, dengan itu namanya. Penyediaannya sangat mirip dengan agar darah, hanya dalam hal ini darah harus dipanaskan agar sel-sel darah merah pecah.

Penyediaannya, seperti agar darah, sangat halus, kerana ia mudah terkontaminasi. Atas sebab ini banyak makmal memilih untuk memperoleh medium ini yang telah disediakan oleh rumah komersial yang menjamin kualiti mereka.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Kegunaan
    • 2.1 Chocolate agar disediakan dengan Columbia agar
    • 2.2 Chocolate agar disediakan dengan asas agar GC (untuk gonococci)
    • 2.3 Chocolate agar disediakan dengan Müeller Hinton agar
    • 2.4 Chocolate agar disediakan dengan Thayer Martin agar
  • 3 Persediaan
    • 3.1 Pengiraan
    • 3.2 Timbang dan larut
    • 3.3 mensterilkan
    • 3.4 Agregasi darah
    • 3.5 Cara lain untuk menyediakan agar agar coklat tanpa menggunakan darah
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Rujukan

Yayasan

Media ini terdiri daripada asas agar yang kaya dengan nutrien dan darah yang dipanaskan. Hemolisis sel darah merah menyediakan faktor X (hemin) dan faktor V (NAD), yang diperlukan untuk pertumbuhan beberapa mikroorganisma, seperti genus. Haemophilus. Ia juga sangat berguna untuk pengasingan Neisserias sp.

Seperti darah agar, media yang berlainan boleh digunakan sebagai asas agar bergantung kepada keperluan. Antara media yang digunakan ialah infusi jantung otak dan soya sedap trypticase, walaupun yang paling disyorkan adalah Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar dan Thayer Martin agar..

Sesetengah varian cawan coklat termasuk suplemen diperkaya secara komersial yang dikenali sebagai Isovitalex atau Polivitex.

Suplemen ini mengandungi vitamin B12, L-glutamin, adenina, guanina hydrochloride, p-aminobenzoic asid, dinucleotide nicotinamide adenina (NAD), pirofosfat thiamine, nitrat ferik, hydrochloride thiamine, cysteine ​​hydrochloride, L-cystine dan glukosa.

Adalah penting untuk diperhatikan bahawa agar coklat lebih diperkaya daripada agar darah, tetapi tidak membenarkan pemerhatian terhadap pola hemolisis.

Kegunaan

Coklat agar disiapkan dengan Columbia agar

Medium ini mengandungi pankin kasein dan jantung yang dicerna, peptida daging yang dicerna, natrium klorida, agar, ekstrak ragi dan kanji jagung. Ia juga kaya dengan vitamin, mineral dan asid amino penting.

Asas ini dengan darah yang dipanaskan sangat sesuai untuk pengasingan bakteria genus Neisseria. Sebaliknya, jika suplemen untuk Brucella ditambah kepada medium, mikroorganisma yang dinyatakan di atas boleh diasingkan. Hasilnya diperbaiki menggunakan darah kuda.

Coklat agar disediakan dengan asas agar GC (untuk gonococci)

Medium ini mengandungi peptones, kanji jagung, buasir monobasic dan dibasic, natrium klorida dan agar.

Kebanyakan persembahan coklat agar secara komersil disediakan dengan asas ini dan mengandungi dipanaskan darah, tetapi campuran sintetik Hemin dan tambahan kimia faktor pertumbuhan, vitamin, mineral, asid amino, glukosa dan faktor V.

Chocolate agar disediakan dengan Müeller Hinton agar

Ia digunakan untuk melaksanakan ujian kerentanan antimikrobial yang memerlukan mikroorganisma, seperti Streptococcus pneumoniae menggunakan 5% darah ram dipanaskan.

Ia juga berfungsi untuk pengasingan utama Neisserias dan Haemophilus, tetapi dalam kes tertentu pengasingan Haemophilus penggunaan darah kuda lebih disukai, kerana ia merupakan sumber faktor X dan V yang kaya.

Sebaliknya, jika sampel yang ditaburkan berasal dari kawasan yang tidak steril, penambahan antibiotik disyorkan untuk menghalang flora normal kawasan tersebut..

Contoh untuk sampel pernafasan di mana terdapatnya bakteria genus yang disyaki Haemophilus Bacitracin digunakan untuk menghalang pertumbuhan Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus dan Saprophytic Neisseria.

Dalam kes sampel chancre kemaluan, di mana ia disyaki Haemophilus ducreyi, telah digunakan dengan jayanya coklat agar disediakan seperti berikut: Mueller - Hinton agar dengan 5% chocolatizada darah kuda, 1% Isovitalex pengayaan dan 3 ug / ml vancomycin.

Chocolate agar disediakan dengan Thayer Martin agar

Media ini khusus untuk pengasingan Neisseria gonorrhoeae. Ia mesti mengandungi antibiotik untuk menghalang flora yang disertakan. Darah kambing digunakan.

Persediaan

Petunjuk untuk penyediaan asas agar digunakan harus dilihat. Mereka berada di belakang bungkusan medium yang kering. Mereka biasanya menjelaskan berapa banyak yang perlu ditimbang untuk menyediakan satu liter medium budaya.

Di makmal anda boleh menyediakan jumlah yang tepat yang diperlukan, ia boleh lebih atau kurang daripada satu liter.

Pengiraan

Peraturan tiga dibuat untuk mengira berapa banyak yang perlu ditimbang untuk menyediakan jumlah yang dikehendaki. Contoh:

Sekiranya selama 1 liter diperlukan untuk berat 40 gr dan makmal memerlukan 800 ml, dikatakan:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Rumusannya adalah seperti berikut:

X = 32 gr (jumlah berat untuk 800 ml).

Timbang dan larut

Kami terus menimbang jumlah yang diperlukan dan meletakkannya di dalam air dengan air.

Haba ke dalam api yang sederhana dan kacau perlahan-lahan dengan pergerakan berputar sehingga medium dehidrasi dibubarkan sepenuhnya, meninggalkannya mendidih selama 1 minit.

Mensterilkan

Fola dimasukkan ke dalam autoklaf untuk mensterilkan medium pada 121 ° C selama 20 minit.

Agregat darah

Apabila meninggalkan autoklaf, ia dibiarkan berehat sehingga suhu medium adalah antara 56-70 ° C untuk meletakkan darah dan campurkan sehingga medium berubah menjadi coklat.

Jika anda akan menambah makanan tambahan, ini adalah masa untuk melakukannya. Kemudian campurkan dan sediakan 20 ml untuk setiap hidangan Petri steril.

Keseluruhan prosedur mesti dilakukan dalam hud aliran laminar atau sekitar pembakar Bunsen.

Biarkan berdiri sehingga mereka mengeras dan terus terbalik di dalam peti sejuk.

Satu lagi cara untuk menyediakan agar agar coklat tanpa menggunakan darah

Medium asas disediakan seperti yang diterangkan di atas, hemoglobin dehidrasi yang diperolehi secara komersial dibubarkan dan disterilkan dalam autoklaf.

Kedua-dua penyelesaian dibenarkan untuk menyejukkan hingga 50 ° C, menyertai dan menambah tambahan. Campurkan dalam keadaan aseptik dan kemudian berkhidmat dalam hidangan petri steril.

Kawalan kualiti

Adalah penting bahawa darah diletakkan pada suhu yang ditunjukkan, kerana ia adalah yang ideal untuk lyse sel darah merah dan pada masa yang sama mengekalkan faktor V yang termosensitif.

Seharusnya tidak ada gelembung pada permukaan agar. Setiap kelompok 100 plat harus diinkubasikan satu atau dua piring di dalam dapur pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk memeriksa kemandulannya.

Untuk hasil terbaik, agar coklat perlu digunakan sejurus selepas persiapan.

Kawalan strain bakteria perlu diambil di makmal untuk menilai keberkesanan medium yang baru disediakan untuk pertumbuhan mikroorganisma yang menuntut utama kepentingan klinikal.

Rujukan

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodriguez C, Guzman D, Llop A. Kemungkinan penggunaan medium budaya berdasarkan agar GC-Biocen Makmal Mikrobiologi. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Boleh didapati di: scielo.sld.
  5. Penyumbang Wikipedia. Chocolate agar. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 17 Disember 2018, 19:54 UTC. Boleh didapati di: en.wikipedia.org.