Simmons citrate agar asas, penyediaan dan penggunaan



The Simmons Citrate agar Ini adalah medium padat yang digunakan sebagai ujian biokimia untuk mengenal pasti mikroorganisma, terutamanya bakteria Gram-negatif. Media asal dicipta oleh Koser pada tahun 1923.

Medium Citrate Koser terdiri daripada kuah yang mengandungi natrium fosfat, ammonium fosfat, monopotassium fosfat, magnesium sulfat dan natrium sitrat..

Seperti yang dapat dilihat, satu-satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah ammonium fosfat, protein dan karbohidrat yang ditinggalkan sebagai sumber unsur-unsur ini, biasanya terdapat dalam media lain..

Oleh itu, bakterium yang disuntik dalam medium itu hanya dapat menghasilkan semula jika ia dapat mengambil karbon sitrat. Ujian ini adalah positif jika terdapat kekeruhan dalam medium, namun ia mempunyai kelemahan yang kekeruhan tidak khusus dapat terjadi.

Masalah ini diselesaikan oleh Simmons sambil menambah agar dan bromothymol biru kepada formula asal Koser. Walaupun prinsipnya sama, ia ditafsirkan secara berbeza.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Mod pembenahan
    • 1.2 Tafsiran
  • 2 Persediaan
  • 3 Gunakan
  • 4 pertimbangan terakhir
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 dibiakkan
    • 4.3 Keamatan warna
  • 5 Rujukan

Yayasan

Sesetengah bakteria mempunyai keupayaan untuk bertahan hidup tanpa adanya penapaian atau pengeluaran asid laktik, yang memerlukan tenaga melalui penggunaan substrat lain. Dalam ujian ini satu-satunya sumber karbon yang ditawarkan ialah sitrat.

Bakteria yang dapat bertahan di bawah syarat-syarat ini dapat memetabolismikan citarasa dengan cepat melalui alternatif kepada laluan tradisional, menggunakan kitaran asid tricarboxylic atau kitaran penapaian sitrat.

katabolisme Citrate oleh bakteria terdiri daripada mekanisme enzim tanpa campur tangan koenzim A. enzim ini diketahui citricasa (oxaloacetate-citrate lyase) atau desmolase sitrat. Reaksi memerlukan kehadiran kation bivalen, yang dalam kes ini dibekalkan oleh magnesium.

Reaksi menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asid organik di tengah pH alkali yang terbentuk dengan menggunakan sumber nitrogen. Asid organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, selanjutnya mengalkali medium.

Mod menyemai

Medium sitrat simmons harus diisap ringan ke ekor ikan menggunakan gelung lurus atau jarum, dan diinkubasi selama 24 jam pada 35-37 ° C Pada akhir masa keputusannya diperhatikan.

Pembenihan dilakukan hanya di permukaan agar. Jangan buat tusuk.

Tafsiran

Sekiranya medium adalah warna asal (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang nyata, ujian itu negatif, tetapi jika medium berubah menjadi biru, ia menunjukkan kehadiran produk alkali, yang dikesan oleh penunjuk pH. Dalam kes ini ujian adalah positif.

Ini berlaku kerana jika bakteria menggunakan karbon sitrat ia juga mampu mengambil nitrogen fosfat amonium dengan mana ia mengeluarkan ammonia, alkali medium.

Sebaliknya, jika pertumbuhan bakteria diperhatikan dalam medium, tetapi tidak ada perubahan dalam warna, ujian juga harus dipertimbangkan positif, kerana jika terdapat pertumbuhan, bakteria tersebut dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon, walaupun tidak ada perubahan pH pada masa ini (kadang-kadang mungkin diperlukan).

Sekiranya ada keraguan dalam tafsiran warna terakhir, ia boleh dibandingkan dengan tiub sitrat tidak bertahan.

Persediaan

Berat 24.2 gr daripada medium dehidrasi untuk satu liter air. Campurkan dan biarkan selama 5 minit kira-kira. Selesai membubarkan medium dengan pemanasan selama 1 atau 2 minit, kacau sering.

Hidangkan 4 ml dalam tiub ujian dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Apabila meninggalkan autoklaf, condong dengan bantuan sokongan sedemikian rupa agar agar menegaskan dalam bentuk puncak seruling dengan sedikit cleat atau bawah dan lebih serong.

PH akhir medium sitrat adalah 6.9 (hijau). Media ini sangat sensitif kepada perubahan pH.

Pada pH 6 atau di bawah, medium menjadi kuning. Warna ini tidak diperhatikan dalam ujian dengan bakteria.

Dan pada pH 7.6 atau ke atas, perubahan sederhana kepada warna biru Prussia yang sengit.

Guna

Simmons citrate agar digunakan untuk pengenalpastian mikroorganisma tertentu, terutamanya bacilli kepunyaan keluarga Enterobacteriaceae dan bacilli bukan glukosa lain..

Pertimbangan terakhir

Simmons sitrat medium adalah ujian yang sangat halus, kerana positif palsu dapat diperoleh jika kesalahan tertentu dibuat.

Penjagaan yang mesti diambil adalah seperti berikut:

Inokulum

Jangan membuat inokulum bakteria sangat tebal atau dicaj kerana ia boleh menyebabkan kuning tembaga di tempat benih membangun, tanpa menjejaskan sepanjang separuh, tetapi percaya bahawa terdapat pertumbuhan. Perkara yang sama tidak bermaksud positif ujian.

Juga, inokulum tebal boleh menjana positif palsu, kerana sebatian organik terbentuk terlebih dahulu dalam dinding sel bakteria mati boleh melepaskan karbon dan nitrogen cukup untuk menjadikan penunjuk pH.

Oleh itu, yang ideal adalah untuk menanam menggunakan jarum bukan pegangan platinum, untuk mengelakkan daripada mengambil bahan yang berlebihan.

Sown

Sebaliknya, apabila bateri telah ditanam untuk pengenalan biokimia organisma dalam ujian soalan, adalah penting bahawa ujian citrate adalah yang pertama untuk disuntik, untuk mengelakkan pemerangkapan protein atau karbohidrat cara lain.

Di bawah keadaan ini adalah mungkin untuk mendapatkan positif palsu, kerana mana-mana bahan yang diperkenalkan dengan kesilapan akan dimetabolisme dan menyebabkan perubahan dalam pH.

Satu lagi cara untuk mengelakkan seret bahan adalah membakar pemegang dengan baik dan mengambil inokulum baru antara satu ujian dan yang lain.

Penjagaan juga perlu diambil apabila menyentuh tanah jajahan untuk melakukan inokulum, kerana ia harus dielakkan untuk menyeret sebahagian daripada agar dari kultur yang datang dari bakteri, kerana yang dijelaskan sebelumnya.

Dalam pengertian ini, Matsen, Sherris dan Branson mengesyorkan mencairkan inokulum dalam penyelesaian fisiologi sebelum mengadaptasi ujian sitrat untuk mengelakkan pemindahan sumber karbon lain.

Keamatan warna

Ia harus diambil kira bahawa keamatan warna yang dihasilkan apabila ujian positif mungkin berbeza-beza mengikut rumah komersial.

Selain itu, terdapat mikroorganisma yang menguji positif pada 24 jam, tetapi terdapat strain lain yang memerlukan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan dalam pH.

Rujukan

  1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Boleh didapati di: bd.com
  5. Makmal Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  6. Makmal Diagnostik Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Boleh didapati di: andinamedica.com.