Agar asas, penggunaan dan penyediaan CLED



The Agar CLED (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) adalah medium budaya padat pembezaan, yang digunakan untuk diagnosis jangkitan saluran kencing. Komposisi medium kultur direka untuk pertumbuhan patogen kencing yang baik dan sesuai untuk kuantifikasi unit pembentukan koloni (CFU).

Media budaya CLED tidak selektif, kerana Gram-negatif dan juga mikroorganisme Gram-positif dapat berkembang di dalamnya. Tetapi ini tidak menjadi masalah, kerana kebanyakan jangkitan saluran kencing disebabkan oleh satu jenis mikroorganisma.

Dalam kes jangkitan polimikrobial 2 atau 3 bakteria yang berbeza boleh didapati, tetapi ia sangat jarang berlaku dan kebanyakan masa ia adalah sampel yang tercemar.

Antara bakteria Gram-negatif yang boleh tumbuh dalam medium ini adalah bakteri yang dimiliki oleh keluarga Enterobacteriaceae dan bakteria enterik lain, uropatogens yang paling kerap terpencil dalam sampel air kencing, yang berikut: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, antara lain.

Begitu juga, di antara bakteria Gram-positif yang boleh tumbuh dalam medium ini Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp dan mereka juga boleh menanam yis, seperti kompleks Candida albicans.

Walau bagaimanapun, kerana komposisi kimia medium itu tidak membenarkan pertumbuhan beberapa patogen genitourinary yang menuntut, seperti Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vagina, antara lain.

Indeks

  • 1 Yayasan agar agar CLED
  • 2 Yayasan agar agar (Bevis)
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 Menyemai sampel air kencing
    • 3.2 Tafsiran
    • 3.3 Pengenalan
  • 4 Penyediaan
  • 5 Rujukan

Yayasan agar agar CLED

Medium kultur CLED mempunyai sumber ekstrak daging sumber, kasein hidrolisis pankreas dan gelatin hidrolisis. Mereka menyediakan nutrien untuk perkembangan bakteria yang tidak beralasan.

Ia juga mengandungi sista, asid amino yang membolehkan pertumbuhan koliform, dibezakan dengan saiznya yang kecil.

Begitu juga, laktosa mengandungi karbohidrat yang boleh fermentasi, oleh sebab ini medium ini adalah pembezaan; dapat membezakan bakteria penapaian dari laktosa tanpa fermentasi.

Bakteria menghidupkan pH medium dengan pengeluaran asid, membangun koloni kuning, manakala bakteria bukan fermentasi tidak menghasilkan perubahan dalam medium, oleh itu mereka mengambil warna agar asli, warna hijau.

Reaksi penapaian terungkap terima kasih kepada kehadiran penunjuk pH, yang dalam medium ini adalah bromothymol biru.

Sebaliknya, kepekatan elektrolit rendah medium menghalang pertumbuhan invasif tipikal genus Proteus, dipanggil kesan berkerumun. Ini menghasilkan kelebihan yang berkaitan dengan cara lain, kerana ia membenarkan pengiraan UFC, termasuk jika genus Proteus hadir.

Walau bagaimanapun, kepekatan rendah elektrolit menghalang pertumbuhan beberapa spesies genus Shigella, Ini adalah kelemahan yang berkaitan dengan cara lain.

Asas CLED agar (Bevis)

Terdapat varian atau pengubahsuaian medium ini dibuat oleh Bevis, yang memasukkan komposisi asid fuchsin asal (penunjuk Andrade) ke dalam komposisi asal. Ia bertindak bersama bromothymol biru untuk membezakan penapaian daripada bakteria bukan fermentasi.

Perbezaan antara medium konvensional dan yang diubahsuai adalah warna yang digunakan oleh koloni. Dalam kes bakteria penapaian laktosa, koloni mendapatkan warna oren berwarna merah jambu dengan halo merah jambu atau merah, manakala yang bukan fermentasi adalah kelabu kebiruan..

Kegunaan

CLED agar digunakan secara eksklusif untuk menyemai sampel air kencing. Penggunaan media ini amat kerap di makmal Eropah, sementara di Amerika ia kurang digunakan.

Pengumpulan sampel mesti memenuhi parameter tertentu untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, termasuk:

  • Tidak mengambil antibiotik sebelum mengambil sampel.
  • Lebih baik mengambil air kencing dari jam pertama pagi, kerana ia lebih pekat, apabila tidak mungkin mengambil sampel dengan kaedah invasif.
  • Basuh betul-betul kemaluan sebelum mengambil sampel.
  • Buang aliran kencing pertama dan letakkan bekas itu.
  • Kumpulkan antara 25 hingga 30 ml air kencing dalam bekas berlabel yang steril.
  • Ambil segera ke makmal yang dikelilingi dalam ais.
  • Ia mesti diproses sebelum pelepasan 2 jam atau didinginkan pada suhu 4 ° C selama maksimum 24 jam.

Menyemai sampel air kencing

Sampel air kencing mestilah dicairkan 1:50.

Untuk pencairan, letakkan 0.5 ml air kencing pesakit dan cairkan dengan 24.5 ml penyelesaian fisiologi steril.

Ukur 0.1 ml air kencing dan sow setiap permukaan dengan spatula drigalski pada medium CLED. Ini adalah kaedah pembenihan yang ditunjukkan untuk menghitung koloni. Itulah sebabnya ia digunakan dalam sampel air kencing, kerana hasilnya mesti dinyatakan dalam CFU / ml.

Untuk kuantifikasi koloni yang diperoleh, meneruskan seperti berikut: mengira koloni plat dan darabkan 10 dan kemudian 50. Dengan cara ini anda mendapat jumlah CFU / ml air kencing.

Tafsiran

Mengira melebihi 100,000 CFU / ml -Indica jangkitan kencing

Mengira di bawah 1000 CFU / ml- Tiada jangkitan

Mengira antara 1000-10,000 CFU / ml -Doubtful, pencemaran mungkin, pengambilan sampel mengulangi.

Pengenalan

Tanah jajahan yang ditanam di agar CLED harus dibuat Gram dan bergantung kepada ciri-ciri morphotipintif mikroorganisma subkultur tertentu dilakukan.

Sebagai contoh, jika ia adalah bakteria Gram negatif, ia akan disemai pada agar MacConkey, di mana penapaian atau bukan laktosa disokong. Di samping itu, agar-agar berkhasiat dilampirkan untuk melaksanakan ujian oksidase.

Sekiranya Gram mendedahkan cocci Gram positif ia boleh disubkultur dalam agar-agar mannitol masin dan agar-agar berkhasiat. Dalam yang terakhir, ujian katalase dijalankan. Akhirnya, jika ragi dipelihara, ia akan disemai di atas Sabouraud agar.

Banyak makmal menghilangkan penggunaan media CLED dan lebih suka hanya menggunakan agar darah, MacConkey dan agar bergizi untuk menyemai sampel air kencing.

Persediaan

Dalam botol bersama satu liter air suling, larutkan 36.2 gr agar agar CLED bubuk. Selepas 5 minit berehat, panaskan agar resusu yang dipanaskan, dicampur terus sehingga mendidih selama 1 minit.

Kemudian sterilkan pada 121 ° C selama 15 minit dalam autoklaf. Sebaik sahaja waktunya berakhir, ia akan dikeluarkan dari autoklaf dan dibenarkan untuk menyejukkan sehingga mencapai suhu 45 ° C. Seterusnya dihidangkan antara 15 - 20 ml di setiap hidangan Petri steril.

Prosedur untuk menghidangkan plat mesti dilakukan dalam hud aliran laminar atau di hadapan pembakar Bunsen untuk mengelakkan pencemaran.

Plat yang dihidang dibenarkan untuk mengukuhkan, diperintahkan dalam pemegang plat terbalik dan disimpan dalam peti sejuk (2-8 ° C) sehingga digunakan.

PH akhir medium yang disediakan hendaklah 7.3 ± 0.2.

Rujukan

  1. Cadangan untuk diagnosis mikrobiologi jangkitan saluran kencing. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Boleh didapati di: scielo.org.
  2. Panchi J. Pengenalpastian agen mikroba yang menyebabkan jangkitan kencing pada pesakit dalaman yang menjalani catheterization pundi kencing. 2016. Kerja sarjana muda untuk memohon gelaran Licentiate di Makmal Klinikal. Universiti Teknikal Ambato. Ecuador.
  3. Makmal Britania. Separuh CLED. Boleh didapati di: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Arahan untuk digunakan, CLED Agar. 2013 Boleh didapati di: www.renylab.ind.br.
  5. Makmal Cultimed Manual asas Mikrobiologi. Boleh didapati di: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Pilihan agar CLED dalam rutin kencing manis. Penilaian prospektif dan perbandingan. Disahkan Mikrobiol Diagnostik Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.