Agar mempunyai asas, penyediaan dan penggunaan standard

The agar akaun standard adalah medium budaya yang tidak selektif, yang direka untuk mengkuantifikasi beban mikrob aerobik yang ada dalam sampel air minuman, air sisa, minuman susu, antara makanan lain. Media ini juga dikenali sebagai PCA agar, untuk akronim dalam Bahasa Inggeris Count Count Agar. Ia dicipta pada tahun 1953 oleh Buchbinder, Baris dan Goldstein.

Akaun medium agar standard terdiri daripada ekstrak ragi, triptein, glukosa, agar dan air sulingan. Perumusan ini mengandungi unsur-unsur pemakanan asas yang membolehkan perkembangan beban mikrobiologi aerobik sekarang, tidak menuntut.

Oleh kerana medium ini tidak mengandungi inhibitor, bakteria boleh berkembang tanpa sebarang sekatan, jadi ia sesuai untuk kiraan jajahan umum. Walau bagaimanapun, teknik kuantifikasi plat tidak dapat mengesan semua bakteria yang ada, tetapi hanya mereka yang mampu berkembang di bawah keadaan persekitaran yang mana standard sowed agar tertakluk..

Di sini, plat teknik pengkuantuman bertujuan untuk menentukan secara amnya jumlah bakteria mesophilic jenis aerobik, iaitu yang dikendalikan dalam suhu antara 25 dan 40 ° C, dengan suhu pertumbuhan optimum pada 37 ° C.

Kumpulan bakteria ini sangat penting, kerana terdapat kebanyakan bakteria patogen untuk manusia.

Perlu diperhatikan bahawa kadang-kadang ia mungkin menarik untuk mengkuantifikasi jumlah bakteria psikotropik yang ada dalam makanan. Bakteria ini adalah yang terbentuk pada suhu rendah (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Begitu juga, bakteria termofilik, yang berkembang di antara 50 ° C hingga 80 ° C atau lebih, boleh menjadi penting dalam beberapa jenis makanan seperti kaleng.

Pengkuantuman mikrob dinyatakan dalam unit pembentukan koloni (CFU) per gram atau sampel mililiter.

Indeks

• 1 Yayasan
• 2 Persediaan
  • 2.1 Untuk teknik tuang plat
  • 2.2 Untuk penanaman permukaan
• 3 Gunakan
  • 3.1 Teknik penuangan plat (biji dengan kedalaman)
  • 3.2 Teknik disemai di permukaan
• 4 Kawalan kualiti
• 5 Had
• 6 Rujukan

Yayasan

Medium penghitungan piawai direka untuk membolehkan perkembangan bakteria aerobik yang tidak memuaskan, kerana ekstrak ragi, triphine dan glukosa menyediakan nutrien yang diperlukan untuk pembangunan mikrob yang baik.

Sebaliknya, medium ini mempunyai warna yang jelas dan penampilan yang telus, itulah sebabnya ia sesuai untuk memaparkan koloni-koloni yang dibangunkan oleh kaedah penanaman mendalam (dituangkan ke dalam pinggan).

Ia juga boleh mengira koloni dengan cara menyemai di permukaan dengan spatula Drigalski.

Apabila beban mikrob adalah tinggi, pembubaran perpuluhan sampel di bawah kajian mesti dilakukan untuk mengira CFUs.

Perlu diingatkan bahawa medium ini disyorkan oleh Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) untuk mengira mesofil aerobik.

Persediaan

Timbang 23.5 gr medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air sulingan. Untuk sepenuhnya membubarkan campuran mesti dipanaskan dengan kerap sehingga kacau sehingga mendidih. Langkah-langkah sub-berikut bergantung kepada teknik pembenihan untuk digunakan.

Untuk teknik menuang plat

Diagihkan dengan mendispens 12 hingga 15 ml ke dalam tiub ujian. Selepas itu, sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Benarkan mengukuhkan secara menegak dalam bentuk blok. Simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Melelehkan isyarat apabila ia akan digunakan. Setelah cair, simpan di dalam tab mandi air pada 44-47 ° C manakala sampel sedang disediakan.

Untuk penanaman di permukaan

Muntaskan medium dalam autoklaf pada 121 ° C dan kemudian mengedarkan 20 ml dalam hidangan petri steril. Biarkan mengukuhkan, membalikkan dan menyimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Sekat pinggan sebelum digunakan. PH medium hendaklah 7.0 ± 0.2.

Guna

Kaedah standard agar digunakan dalam teknik count mesophil aerobik semasa analisis mikrobiologi air dan makanan. Penghitungan mesophil aerobik adalah perlu, kerana ia menentukan kualiti kebersihan sampel di bawah kajian.

Penerapan teknik ini (menggunakan medium ini) membolehkan visualisasi makroskopik koloni terpencil untuk kuantifikasi mereka.

Teknik menuang plak (unggulan dengan kedalaman)

-Prosedur

Teknik ini terdiri daripada yang berikut:

1) Homogenkan sampel untuk mengagihkan semula bakteria.

2) Suspensi awal dilakukan dalam botol steril atau beg, menghormati nisbah 10 g atau 10 ml sampel dalam 90 ml pengencer (10^-1).

3) Dari penggantungan awal pelepasan perpuluhan yang berkaitan dibuat berdasarkan jenis sampel. Ex: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Pelepasan dibuat dengan air peptone atau buffer fosfat.

Untuk melakukan ini, ambil 1 ml penggantungan awal dan letakkan dalam 9 ml pengencer, teruskan pengenceran jika perlu, kini mengambil 1 ml pencairan.^-2 dan sebagainya.

4) Ambil 1 ml setiap pencairan dan letakkan dalam hidangan Petri steril kosong.

5) Tambah ke dalam setiap plat 12 hingga 15 ml kiraan piawai agar sebelumnya cair dan tetapkan pada 44 - 47 ° C.

6) Berikan pergerakan putar yang lancar ke plat untuk mengedarkan sampel ke dalam agar seragam dan membolehkan untuk menguatkan.

7) Plat terbalik dan terinkub di 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam.

8) Setelah waktunya selesai, lanjutkan untuk memeriksa plat dan hitung koloni dalam pencairan yang membolehkannya. Ia dipilih untuk mengira plat yang mempunyai antara 30 hingga 300 CFU.

Pengiraan boleh dilakukan secara manual atau peralatan kaunter koloni boleh digunakan.

Nilai yang dibenarkan bagi sampel ml mungkin berbeza-beza dari satu negara ke negara lain mengikut piawaian di mana mereka ditadbir.

-Pengiraan UFC

Pengiraan umum dibuat menggunakan formula berikut:

Terangkan hasil dalam 1 atau 2 digit, didaraskan oleh asas yang sesuai 10. Contohnya: jika hasilnya adalah 16.545, ia dibulatkan berdasarkan angka ketiga hingga 17.000 dan akan dinyatakan seperti berikut: 1.7 x 10⁴. Sekarang, jika hasilnya 16.436 adalah bulat kepada 16,000 dan dinyatakan 1.6 x 10⁴.

Teknik ditanam di permukaan

-Prosedur

-Inokulasi dengan 0.1 ml sampel langsung jika ia cair, penggantungan awal 10^-1 atau pelarutan berturut-turut 10^-2, 10^-3 dan sebagainya, di tengah-tengah akaun agar plat standard.

-Mengedarkan sampel sama rata dengan spatula Drigalski atau batang kaca berbentuk L. Biarkan selama 10 minit.

-Plat terbalik dan terinkub di aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam.

-Teruskan untuk menghitung koloni, pilih pinggan yang berada di antara 20 - 250 CFU.

-Pengiraan UFC

Untuk pengiraan, faktor pengenceran digunakan, yang berlawanan. Nombor ini dibulatkan kepada 2 digit yang signifikan (pembulatan mengikut angka ketiga) dan dinyatakan dalam asas 10 kuasa. Sebagai contoh, jika 224 CFU dikira dalam sampel tanpa pencairan (10^-1), 22 x 10 dilaporkan¹  UFC, tetapi jika angka itu adalah 225 dilaporkan 23 x 10¹ UFC.

Sekarang, jika anda menghitung 199 CFU dalam pencairan 10^-3, 20 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC, tetapi jika 153 CFU dikira dalam pencairan yang sama, 15 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC.

Kawalan kualiti

Medium budaya kiraan piawai boleh dinilai menggunakan strain yang diperakui yang diketahui, seperti: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Jika medium budaya berada dalam keadaan yang optimum, pertumbuhan yang memuaskan dijangka dalam semua kes, kecuali untuk L. fermentum yang boleh mempunyai prestasi biasa.

Untuk menilai kemandulan medium budaya, satu atau dua plat setiap kumpulan yang disediakan (tidak diguna) harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam. Pada akhir masa ini, tiada pertumbuhan atau perubahan warna media harus diperhatikan..

Had

-Jangan mencairkan agar lebih daripada sekali.

-Medium yang disediakan boleh bertahan sehingga 3 bulan selagi ia disimpan dalam peti sejuk dan dilindungi dari cahaya.

-Media ini tidak sesuai untuk menuntut mikroorganisma, atau anaerobes.

Rujukan

1. Pentadbiran Kebangsaan Makanan Makanan dan Perubatan Teknologi (ANMAT). Analisis mikrobiologi makanan, metodologi analisis rasmi, mikroorganisma penunjuk. 2014 Volum 3. Boleh didapati di: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plate Count Agar. 2009. Boleh didapati di: http://f-soria.es
3. Makmal Conda Pronadisa. Agar kaedah standard (PCA) mengikut APHA dan ISO 4833. Boleh didapati di: condalab.com
4. Makmal Britania. Mengira pada plat agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik Analisis Mikrobiologi Makanan. Ed ed. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico Boleh didapati di: depa.fquim.unam