Agar asas, penyediaan dan penggunaan EMB



The EMB agar adalah medium budaya pepejal terpilih dan perbezaan yang digunakan untuk mengasingkan bakteria Gram negatif, terutamanya dari keluarga Enterobacteriaceae, dan bakteria Gram negatif yang tidak menuntut. Ia juga dikenali dengan akronim EAM, yang bermaksud biru eosin-metilena.

Media ini dicipta oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Ia mengandungi peptone, laktosa, sukrosa, fosfat dipotassium, agar, eosin, metilena biru dan air. Ia sangat mirip dengan agar MacConkey, terutamanya jika menggunakan EMB agar diubahsuai oleh Levine, yang tidak mengandungi sukrosa.

Malah, setiap makmal memutuskan sama ada ia berfungsi dengan satu atau yang lain, kerana ia memenuhi fungsi yang sama, walaupun secara biokimia mereka berbeza.

Ia juga memberikan kelemahan yang sama seperti agar MacConkey klasik dari segi pengeluaran yang dihasilkan oleh genus Proteus. Oleh itu, untuk mengelakkan fenomena ini, anda boleh meningkatkan kepekatan agar sehingga 5%.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Selektif
    • 1.2 Berbeza
  • 2 Persediaan
  • 3 Kegunaan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 pertimbangan akhir
  • 6 Rujukan

Yayasan

Selektif

EMB agar adalah halus terpilih kerana ia mengandungi pewarna anilinic (eosin metilena biru), yang bertindak sebagai perencat, menghalang pertumbuhan kebanyakan bakteria Gram-positif dan sesetengah bakteria negatif Gram menuntut.

Walau bagaimanapun, agar ini mempunyai kelemahan bahawa beberapa bakteria Gram-positif boleh menahan kehadiran bahan-bahan menghambat dan tumbuh sebagai koloni berjalur berwarna tidak berwarna, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus.

Anda juga boleh menanam ragi tertentu, seperti Candida albicans kompleks, Ia akan memberikan koloni merah jambu yang sangat kecil. Malah chlamydospores boleh dibangunkan dari yis ini jika sampel disemai dengan kedalaman.

Pembezaan

Selain itu, agar EMB ini juga merupakan medium berbeza, sejak pewarna ini bersama-sama (eosin metilena biru) mempunyai harta membentuk mendakan dalam pH asid, dengan itu mereka berkhidmat sebagai penunjuk dikemukakannya.

Oleh itu, bakteria laktosa atau sukrosa yang lemah menghasilkan koloni berwarna ungu dalam 24 hingga 48 jam. Contohnya Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.

Mereka bakteria yang sangat menapai laktosa, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, sebagai Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, membentuk mendakan hitam kehijauan, memberikan ciri-ciri bersinar metalik dalam spesies ini.

Perlu diingatkan bahawa jika medium levine EMB digunakan (tanpa sukrosa), Yersinia enterocolitica dan Proteus penneri mereka akan menghasilkan koloni yang telus.

Bakteria yang tidak menapai laktosa atau sukrosa dipelihara oleh kehadiran peptones, yang menyediakan asid amino dan nitrogen yang diperlukan untuk pembangunan bakteria, dan menghasilkan koloni telus. Sebagai contoh, genera Salmonella dan Shigella, antara lain.

Ia juga penting untuk ambil perhatian bahawa genus Acinetobacter mungkin mempunyai lavender jajahan biru, walaupun tidak fermenter laktosa, atau sukrosa, tetapi mempunyai harta menetapkan biru metilena dalam dinding sel mereka. Ini juga boleh berlaku dengan bakteria oksidatif lain.

Persediaan

Sederhana dehidrasi sederhana adalah cahaya kuning.

Untuk mempersiapkan medium budaya ini, 36 gram medium dehidrasi perlu ditimbang dan digantung dalam botol yang mengandungi satu liter air sulingan.

Selepas meninggalkan campuran selama 5 minit berehat, bawa fola ke sumber haba, bercampur dengan kuat dan sentiasa sehingga ia mendidih dan ia dibubarkan sepenuhnya..

Selepas itu, medium budaya yang dibubarkan mesti disterilkan menggunakan autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Pada akhir masa, ia dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan beristirahat sebentar. Kemudian ia dihidangkan panas (45 - 50 ° C) antara 15 hingga 20 ml agar di setiap hidangan petri steril. Medium ini harus litmus biru.

Selepas berkhidmat dengan pinggan dibiarkan sedikit terdedah sehingga agar sejuk sedikit. Kemudian mereka dilindungi dan dibenarkan untuk menguatkan sepenuhnya. Kemudian, mereka diperintahkan dalam pemegang plak yang terbalik dan disimpan dalam peti sejuk (8 ° C) sehingga ia digunakan.

Prosedur ini sebaiknya dilakukan dalam hud aliran laminar atau di hadapan pembakar Bunsen untuk mengelakkan pencemaran.

Adalah penting untuk diingat bahawa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang akan ditimbang untuk menyediakan medium kebudayaan.

PH akhir medium hendaklah 7.2 ± 0.2

Kegunaan

medium ini digunakan untuk menyemai air kencing dan najis atau apa-apa jenis sampel klinikal, terutamanya jika anda mengesyaki kehadiran Gram tak berat bakteria negatif seperti riba milik keluarga Enterobacteriaceae, yang tumbuh dengan baik dalam medium ini.

Bakteria enteropatogen dari genera Shigella dan Salmonella dibezakan oleh koloni mereka yang tidak berwarna atau sedikit ambar.

Bakteria lactose lain juga tidak berkembang, seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, dan lain-lain..

Begitu juga, medium ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologi makanan dan air, kerana ia sesuai untuk fasa konfirmasi lengkap dari penentuan coliform, iaitu, untuk menguatkan kehadiran E. coli dari keruh EC keruh, dari teknik nombor paling mungkin (NMP).

Kawalan kualiti

Untuk mengesahkan bahawa medium budaya yang baru ditanam berfungsi dengan baik, strain kawalan boleh ditanam untuk melihat ciri-ciri koloni dan mengesahkan bahawa ia memberi seperti yang diharapkan.

Untuk ini, strain ATCC atau strain yang dikenal pasti E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteria Gram-positif, seperti S. aureus.

Ia dijangkakan bahawa E. coli Menjana koloni hitam kebiru-biruan dengan kilauan logam hijau. Selagi, Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp mereka mesti memberikan koloni mukus yang baik-kebiruan hitam.

Untuk bahagiannya, Salmonella typhimurium dan Shigella flexneri, mereka mesti membangunkan koloni besar, tidak berwarna atau dengan warna kuning ambar.

Akhirnya genre Pseudomonas aeruginosa ia tumbuh sebagai koloni berwarna tanpa saiz yang tidak teratur, sedangkan bakteria Gram-positif harus benar-benar menghalang atau tumbuh dengan jaya dengan koloni yang sangat kecil.

Pertimbangan terakhir

Kadang-kadang pensterilan menyebabkan biru metilena untuk mengurangkan, memerhatikan medium oren. Agar biru metilena untuk mengoksidasi dan warna ungu untuk pulih, ia mesti dicampur perlahan sehingga warna pulih.

Juga, selepas pensterilan boleh menimbulkan pewarna, maka ia mesti dicampur dengan baik sebelum menghidangkan hidangan Petri.

Rujukan

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik Analisis Mikrobiologi Makanan. Ed ed. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Pencirian dan Pengedaran Strain Escherichia coli Potensinya Patogen Isolates Broiler Ayam dari Ladang Ternakan di Peru. Teruskan penyiasatan. doktor haiwan. Peru 2012 23 (2): 209-219. Boleh didapati di: scielo.org.
  3. Makmal Conda S.A. Eosin Agar dan Methylene Blue. 2010. Boleh didapati di: condalab.com
  4. Makmal Britania. Levine E.M.B (Dengan Eosin dan Methylene Blue) 2011. Boleh didapati di: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), diubah suai. 2013. Boleh didapati di: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial