Agar Endo asas, penyediaan dan penggunaan



The Endo agar atau medium Endo adalah medium budaya pepejal yang padat dengan tahap pemilihan tertentu. Formula asal dicipta oleh Endo pada tahun 1904 untuk membezakan bakteria laktosa penapaian daripada bakteria tanpa fermentasi. Pada mulanya ia direka untuk pengasingan Salmonella typhi, tetapi kemudian matlamat medium beralih kepada pencarian untuk coliform.

Prinsip Endo agar telah dikekalkan, tetapi perumusannya telah mengalami perubahan yang tak terhitung sejak bertahun-tahun. Pada masa ini, medium ini terdiri daripada tisu haiwan yang dicerna peptida, laktosa, hidrogen fosfat dipotassium, natrium sulfit, fuchsin asas dan agar.

Penggunaan utama media telah dikaitkan dengan pengasingan dan pembezaan bakteri negatif Gram milik keluarga Enterobacteriaceae dan keluarga lain yang berdekatan..

Long telah digunakan dalam pengesanan koliform dalam sampel air, makanan dan tenusu, tetapi kini telah berpindah menggunakan medium ini fungsi lain yang serupa. Walau bagaimanapun, beberapa makmal mikrobiologi menggunakan agar ini untuk pengasingan Enterobacteriaceae dari sampel asal klinikal.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Variasi agar m-Endo
  • 3 Gunakan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Had
  • 6 Rujukan

Yayasan

Endo agar mengandungi peptones yang berfungsi sebagai sumber asid amino, nitrogen, karbon dan tenaga, yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisma yang tidak menguntungkan.

Sebaliknya, watak sedikit terpilih daripada agar disediakan dengan penambahan natrium sulfit dan fuchsin asas; kedua-dua komponen ini sebahagiannya atau sepenuhnya menyekat pembangunan kebanyakan bakteria Gram-positif.

Watak pengkamiran diberikan oleh kehadiran karbohidrat beragi, yang dalam kes ini adalah laktosa dan asas Fuchsin, yang juga berfungsi sebagai penunjuk pH.

Bakteria gram-negatif yang tumbuh di agar ini dan mampu menapai laktosa akan membentuk koloni merah jambu yang kuat; menjadi pathognomonik Escherichia coli pembentukan koloni merah gelap dengan warna hijau bersinar hijau. Ini disebabkan pengeluaran tinggi asid daripada penapaian karbohidrat.

Harus diingat bahawa medium yang ada di sekitar koloni juga berubah menjadi warna merah jambu yang kuat. Walaupun bacilli gram-negatif tidak menghasilkan julat bentuk laktosa berwarna merah jambu pucat yang sama seperti sederhana atau tidak berwarna.

Dipotassium hydrogen fosfat mengimbangi pH medium dan agar adalah komponen yang menyediakan konsisten padat.

Persediaan

Endo Agar

Berat 41.5 gr daripada medium kering dan larut dalam 1 liter air sulingan. Panaskan campuran dengan mengaduk kerap sehingga terdapat pembubaran jumlah medium. Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C, pada tekanan 15 lb, selama 15 minit.

Apabila mengeluarkan dari autoclave, biarkan sejuk pada suhu kira-kira 45-50 ° C, goncang campuran untuk homogenize sebelum berkhidmat. Tuangkan 20 ml ke dalam hidangan Petri steril.

Biarkan plat mengukuhkan, membalikkan dan menyimpan dalam kotak atau balut dengan kertas gelap sebelum menyimpan di dalam peti sejuk. Sangat penting untuk melindungi medium yang disediakan dari cahaya langsung. Amalan yang disyorkan adalah untuk menyediakan jumlah sebenar yang diperlukan.

Sekiranya disimpan di dalam peti sejuk, pinggan harus diganggu sebelum digunakan.

PH medium hendaklah antara 7.2 hingga 7.6 dan warna medium yang disediakan adalah merah jambu pucat..

Variant agar m-Endo

Satu lagi versi Endo agar (m-Endo) berikutan formula McCarthy, Delaney dan Grasso, yang mengandungi lebih sebatian dan berbeza dalam bentuk penyediaan.

Varian ini mengandungi: tryptose laktosa, enzim dicerna kasein enzim dicerna tisu haiwan, natrium, kalium fosfat dibasic, natrium sulfit, ekstrak yis, kalium fosfat yg berdasar satu, Fuchsin asas, natrium deoxycholate klorida, sulfat lauryl natrium dan agar.

Dalam kes ini, kita menimbang 51 g daripada medium kering dan menggantungnya dalam 1 liter air suling yang mengandungi 20 ml etanol.

Panas sedikit sambil kacau hingga medium sepenuhnya dibubarkan. Jangan terlalu panas dan jangan sembuh di autoclave. Setelah campuran itu homogen, berkhidmat dalam hidangan petri steril dan biarkan menguatkan.

Guna

Di sesetengah negara ia masih digunakan untuk mengira jumlah koliform dan fecal dalam sampel air dan makanan, terutamanya kehadiran Escherichia coli sebagai penunjuk utama pencemaran tahi.

M-Endo Agar disyorkan oleh Persatuan Amerika Public Health (APHA) untuk program pemantauan dan kawalan pembasmian kuman dan rawatan air sisa, dan juga dalam menilai kualiti air minuman.

Kaedah yang paling digunakan adalah penapisan membran, selepas pengayaan sampel dengan suplai Lauryl sulfat selama 2 hingga 4 jam.

Ia juga boleh digunakan sebagai pengganti untuk EMB agar dalam analisis mikrobiologi makanan dan air untuk teknik nombor paling mungkin (NMP), khususnya dalam fasa pengesahan yang lengkap untuk menyokong kehadiran E. coli dari keruh EC keruh.

Kawalan kualiti

Untuk menilai kualiti batch Endo agar yang disediakan, strain kawalan diketahui atau diperakui disemai.

Antara jenis yang boleh digunakan untuk tujuan ini adalah: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 dan Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Strainnya ditaburkan oleh keletihan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Keputusan yang dijangka adalah:

  • Untuk Escherichia coli: koloni merah yang kuat, dengan bersinar logam.
  • Untuk E. cloacae dan K. pneumoniae koloni harus menjadi mucoid merah jambu.
  • Dalam kes S. typhimurium, S. flexneri dan P. mirabilis koloni biasanya merah jambu pucat atau tidak berwarna.
  • Akhirnya, E. faecalis ia dijangka sebahagiannya dihalang, oleh itu pertumbuhannya harus miskin dengan koloni yang sangat kecil merah jambu yang kuat.

Had

-Medium Endo mempunyai kuasa selektif rendah, oleh itu, ada kemungkinan beberapa mikroorganisma Gram positif seperti Staphylococcus, Enterococcus dan juga ragi boleh tumbuh.

-Bakteri lain yang tidak termasuk dalam keluarga Enterobacteriaceae boleh berkembang dalam medium ini, sebagai contoh Pseudomonas sp dan Aeromonas sp. Ciri-ciri strain ini adalah koloni tidak teratur tanpa warna.

-Medium ini disediakan sangat sensitif terhadap cahaya, oleh itu, pendedahan yang berpanjangan untuk ini merosot sistem penunjuk, tidak merosakkan merosakkan medium.

-Komponen medium dianggap karsinogenik, oleh itu hubungan langsung harus dielakkan.

-Media dehidrasi sangat menyerap dan harus disimpan di dalam bekas asalnya pada suhu bilik, tertutup rapat dan dalam persekitaran yang kering.

Rujukan

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Boleh didapati di: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 Feb 2019, 22:55. Terdapat dalam: en.wikipedia.
  4. Makmal MercK. Endo agar 2019. Boleh didapati di: merckmillipore.com
  5. Laboratori Helaian Teknikal. M -Endo Agar LES. 2015. Boleh didapati di: liofilchem.net