Agar Hektoen asas, penyediaan dan kegunaan



The Hekten agar atau enteric Hektoen agar adalah medium budaya yang padat, terpilih dan berbeza. Ia dicipta di Institut Hektoen oleh King dan Metzger untuk pengasingan bakteria enteropatogen dari genera Shigella dan Salmonella..

sederhana ini terdiri daripada pepton proteose, ekstrak yis, garam hempedu, laktosa, sukrosa, salicin, natrium tiosulfat, natrium klorida, sitrat besi, ammonium sitrat, bromothymol biru, Fuchsin asid dan agar. Perumusan ini membolehkan untuk membezakan genera Shigella dan Salmonella dari bakteria lain yang mampu berkembang dalam medium ini.

Walaupun ada cara lain dengan fungsi yang sama seperti Hekten agar, ini memberikan kelebihan yang lebih besar dibandingkan dengan cara lain, terutama apabila anda ingin memulihkan spesies Shigella.

Spesies genera menghasilkan masalah gastrousus yang teruk pada manusia akibat penggunaan makanan tercemar; oleh itu penghantaran adalah fecal - lisan. Itulah sebabnya penggunaan agar Hekten terutamanya ditunjukkan dalam analisis mikrobiologi sampel najis dan makanan..

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
  • 3 Gunakan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Had
  • 6 Rujukan

Yayasan

Hekten agar mengandungi peptone dan ekstrak ragi sebagai sumber nutrien, menyediakan unsur-unsur penting untuk pembangunan mikrob.

Walau bagaimanapun, ia juga mempunyai garam hempedu yang bertindak dengan menghalang pertumbuhan beberapa bakteria, terutamanya Gram positif dan beberapa Gram negatif. Ia adalah untuk sebab ini ia dianggap medium terpilih.

Sebaliknya, agar Hekten adalah medium perbezaan. Hartanah ini diberikan oleh kehadiran penapaian karbohidrat seperti laktosa, sacarora dan salicin, dengan penunjuk sistem pH, yang diwakili oleh bromothymol biru dan Asid Fuchsin.

Semua bakteria yang mampu berkembang dalam medium ini yang tidak termasuk dalam genus Salmonella dan Shigella akan membangunkan koloni salmon atau oren dengan pengecualian genus Proteus. Ini disebabkan oleh penapaian satu atau beberapa karbohidrat yang hadir, yang menghalang medium, yang menyebabkan penunjuk pH bertukar.

Sementara itu, genus Shigella dan Salmonella tidak dapat menapai sebarang karbohidrat masa ini, hanya menggunakan pepton sebagai sumber tenaga, yang alkalinized sederhana dan oleh itu tanah jajahannya berwarna hijau-biru.

Juga dalam medium ini boleh dibezakan bakteria yang mampu membentuk hidrogen sulfida (gas tanpa warna). Sodium thiosulfate bertindak sebagai sumber sulfur manakala sitrat besi adalah agen yang mendedahkan. Kedua-dua sebatian ini memungkinkan pembentukan hentaman hitam sulfida besi yang membuktikan reaksi.

Endapan hitam di tengah tanah jajahan dengan halo telus di sekeliling memberikan penampilan mata ikan. Ciri ini menunjukkan kehadiran genus Salmonella.

Akhir sekali, natrium klorida mengekalkan keseimbangan osmosis dan agar memberikan konsistensi padu kepada medium.

Persediaan

Timbang 76 g medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air sulingan. Goncangkan campuran dengan kuat dan kemudian biarkan selama 10 hingga 15 minit. Ia boleh dipanaskan dan direbus, memberikan pergerakan berputar sehingga pembubaran totalnya. Media ini tidak autoklaf.

Apabila medium mencapai suhu kira-kira 45 ° C, jumlah 20 ml dituangkan secara langsung ke dalam hidangan Petri steril..

Agen dibenarkan untuk menguatkan. Pada masa itu mereka bersedia untuk digunakan. Adalah dinasihatkan untuk menggunakannya dengan segera. Jika mereka tidak mungkin, mereka harus disimpan dalam peti sejuk sehingga ia digunakan.

Plat mesti dikeluarkan dari peti sejuk sebelum menanamnya untuk mengambil suhu bilik.

PH medium hendaklah 7.5 ± 0.2. Warna medium dehidrasi adalah ungu dan disediakan berwarna hijau kecoklatan.

Guna

Penggunaan Hekten agar disarankan untuk mencari bakteria genus Shigella dan Salmonella dalam bentuk najis dan makanan..

keupayaan untuk mengasingkan bakteria ini jika sampel sebelum ini dalam broths khas, seperti selenite, selenite cystine sup, sup tetrathionate, diperkaya dengan ketara meningkatkan dan lain-lain.

Inokulum mestilah kuat dan penaburan dilakukan dengan cara mengejar. Plat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.

Inkubasi disyorkan untuk 48 jam kerana ciri-ciri koloni lebih jelas untuk tafsiran dan pembezaannya pada masa ini.

Kawalan kualiti

Untuk menjalankan kawalan kualiti pada medium ini, strain bakteria yang diperakui digunakan, seperti: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 dan Shigella sonnei ATCC 25931.

Keputusan yang dijangka adalah seperti berikut: Salmonella typhimurium dan  Salmonella enteritidis mereka mesti membangunkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam. Sedangkan spesies Shigella akan tumbuh sebagai koloni biru-hijau.

Anda juga boleh menyertakan strain Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Dalam kes ini, ciri-ciri diperhatikan adalah seperti berikut: E. coli dan K. pneumoniae Dalam medium ini mereka akan membangunkan koloni salmon-to-oren, dengan mendakan warna yang sama di sekelilingnya. Sementara itu, Proteus akan membangunkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam.

Sementara itu S. aureus dan  E. faecalis harus dihalang, kadangkala E. faecalis berjaya tumbuh sebagai koloni kuning, sangat kecil.

Sebaliknya, kerana medium ini tidak disterilkan dalam autoklaf, adalah penting untuk menilai kemandulan medium. Oleh itu, setiap kumpulan yang disediakan harus diinkubasikan satu hingga dua piring tanpa mengocok pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerob.

Sudah tentu ia dijangka bahawa tidak ada pertumbuhan apa-apa jenis di atas pinggan.

Had

-Spesies Proteus boleh berkembang dalam persekitaran ini dan ciri-ciri koloni mereka boleh dikelirukan dengan spesies Salmonella atau Shigella. Atas sebab ini mana-mana jajahan yang mencurigakan mesti disahkan dengan ujian biokimia.

-Adalah perlu untuk mengiringi penggunaan medium ini dengan lain-lain agar selektif yang kurang, kerana jika mikroorganisme yang dicari didapati dalam kepekatan rendah ia tidak dapat berkembang dalam medium ini.

-Jangan terlalu panas semasa penyediaannya, kerana haba berlebihan mengubah komposisi medium.

-Kolesterol Salmonella lactose-fermentasi yang luar biasa mungkin kelihatan tanpa disedari.

Rujukan

  1. Penyumbang Wikipedia. Hekten enteric agar. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 13 Mac, 2019, 23:38 UTC. Boleh didapati di: .wikipedia.org / Diakses pada 16 Mac, 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Boleh didapati di: bd.com
  3. Makmal Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Boleh didapati di: f-soria.es
  5. Difco & Manual BBL, Hektoen Enteric Agar. Edisi ke-2. Boleh didapati di: bd.com/europe