Agar LIA (Lysine Iron) asas, penyediaan dan kegunaan



The LIA agar (Lysine Iron) adalah ujian biokimia yang digunakan untuk mengenal pasti bakteria keluarga Enterobacteriaceae. Media ini dicipta oleh Edwards dan Fife, berdasarkan formula Falkow.

Pada mulanya ujian ini adalah sup yang mengandungi peptone, ekstrak ragi, glukosa, L-lisin, ungu bromokresol dan air suling. Edwards dan Fife menambah agar-agar, ferment ammonium citrate dan natrium thiosulfate.

Ujian ini pada dasarnya terdiri daripada menunjukkan kehadiran enzim lysine decarboxylase, mampu bertindak balas dengan kumpulan carboxyl asid amino L-lisin. Dehidrasi asid amino juga boleh berlaku kerana adanya enzim lysine deaminase.

Selain itu, komposisi medium membolehkan untuk menunjukkan keupayaan beberapa genera bakteria untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Akhirnya, ia juga mungkin untuk melihat generasi atau tidak gas di tengah.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Peptone dan ekstrak ragi
    • 1.2 Glukosa
    • 1.3 L-lisin
    • 1.4 penunjuk pH (ungu bromokresol)
    • 1.5 Ammonium ferric sitrat dan natrium thiosulfat
  • 2 Tafsiran ujian
    • 2.1 Decarboxylation of lysine
    • 2.2 Deamination of lysine
    • 2.3 Pengeluaran hidrogen sulfida (H2S)
  • 3 Rekod keputusan
  • 4 Penyediaan
  • 5 Kegunaan
  • 6 Rujukan

Yayasan

Peptone dan ekstrak ragi

Seperti kebanyakan media kebudayaan, lysine besi agar mengandungi komponen yang menyediakan sumber nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Komponen ini diwakili oleh peptone dan ekstrak ragi.

Glukosa

Juga, agar ini mengandungi glukosa karbohidrat yang boleh fermentasi. Telah diketahui bahawa semua bakteria keluarga Enterobacteriaceae fermentasi glukosa.

Langkah ini adalah penting, kerana ia akan bertanggungjawab untuk mengasapi medium, syarat penting untuk enzim lysine decarboxylase, jika ada, untuk bertindak pada substratnya.

Dalam beberapa genera bakteria, pengeluaran gas akibat penapaian glukosa dapat dilihat.

Gas dibuktikan apabila terdapat anjakan agar di dalam tiub, meninggalkan ruang kosong di bahagian bawah tiub, atau dengan membengkokkan medium dalam dua atau lebih bahagian.

L-lisin

Apabila lisin disahboksilasi, diamine (cadaverine) dan karbon dioksida terbentuk.

Decarboxylation berlaku di hadapan fenfat koenzyme pyridoxal. Tindak balas ini tidak dapat dipulihkan.

Penunjuk PH (ungu bromokresol)

Semua perubahan pH berlaku dalam medium oleh tindak balas yang berbeza, dikesan oleh penunjuk pH ungu bromokresol.

Dalam pengertian ini, apabila terdapat pengasidan medium berubah menjadi kuning, dan apabila terdapat alkalisasi medium kembali ke warna ungu atau ungu asal.

Apabila deaminasi lysine berlaku oleh kehadiran enzim lysine deaminase, bentuk warna kemerahan di permukaan, yang tipikal dalam genera Proteus, Providencia dan beberapa spesies Morganella.

Hal ini disebabkan oleh fakta bahawa semasa proses asupan alpha-keto-carbonic acid terbentuk, yang bereaksi dengan ammonium sitrat dengan kehadiran oksigen, yang menyebabkan warna yang disebutkan di atas.

Ammonium ferric sitrat dan natrium thiosulfate

Sebaliknya, bakteria yang menghasilkan hidrogen sulfida akan dibuktikan dengan kehadiran natrium thiosulfate (sumber sulfur) dan sitrat ammonium sitrat, yang merupakan pemaju H2S.

Bakteria yang mempunyai enzim thiosulfate reductase mempunyai kemampuan untuk bertindak dengan mengurangkan natrium thiosulfate hadir, membentuk sulfat dan hidrogen sulfida (H2S).

Yang terakhir adalah gas tanpa warna, tetapi apabila ia bertindak balas dengan garam besi membentuk logam sulfida ferrous, yang merupakan senyawa yang tidak larut (precipitated hitam yang kelihatan).

Walau bagaimanapun, keupayaan pembentukan H2S dengan medium ini tidak begitu boleh dipercayai, kerana sesetengah bakteria leptin negatif decarboxylase mampu menghasilkan H2S tidak akan membentuk endapan hitam, kerana keasidan medium mengganggu. Oleh itu, disyorkan untuk memeriksa dengan cara lain yang mengandungi besi.

Tafsiran ujian

Decarboxylation of lysine

Tiub harus dibaca selepas tamat tempoh 24 jam inkubasi, jika tidak ada risiko salah menafsirkan tindak balas, melaporkan negatif palsu.

Perlu diingat bahawa tindak balas pertama yang akan berlaku adalah penapaian glukosa, oleh itu semua tiub selepas 10 hingga 12 jam akan berubah menjadi kuning.

Jika pada akhir tempoh inkubasi (24 jam) latar belakang kuning dengan permukaan ungu atau ungu diperhatikan, reaksi negatif. Warna ungu permukaan bersesuaian dengan alkalinisasi medium dengan penggunaan peptone.

Reaksi positif adalah salah satu di mana bahagian bawah dan permukaan tiub sepenuhnya ungu, iaitu, ia kembali ke warna asal.

Oleh itu, siapa yang menentukan positif ujian adalah asas atau bawah medium. Jika anda mempunyai keraguan tentang warna, anda boleh membandingkannya dengan tiub LIA yang tidak disuntik.

Penyiasatan lisin

Satu tiub yang membuktikan deaminasi lisin akan mempunyai permukaan coklat kemerahan dan latar belakang kuning (asid), atau seluruh tiub kemerahan..

Reaksi ini ditafsirkan sebagai negatif untuk decarboxylation lisin, tetapi positif untuk deaminasi lisin.

Tindak balas ini ditakrifkan dan ditafsirkan dalam serong.

Pengeluaran hidrogen sulfida (H2S)

Reaksi positif diperhatikan oleh penampilan mendakan hitam di semua atau sebahagian medium. Secara umumnya antara sempadan serong dan pangkalan.

Jika endapan berlaku di seluruh tiub, ia tidak akan menunjukkan reaksi lain yang berlaku dalam medium.

Catat hasilnya

Apabila mentafsir ujian, hasilnya direkodkan seperti berikut:

Pertama membaca serong, kemudian bahagian bawah atau taco, maka pengeluaran H2S, dan akhirnya pengeluaran gas.

Contoh: K / A + (-). Ini bermakna:

  • K: Bezel alkali (ungu)
  • A: Latar belakang asid (kuning), iaitu tindak balas decarboxylation negatif dan deaminasi negatif.
  • +: Pengeluaran hidrogen sulfida
  • (-): Tanpa gas.

Persediaan

Timbang 35 gr daripada lysine agar disahhidratkan besi dan larut dalam satu liter air sulingan.

Panaskan sehingga agar dibubarkan sepenuhnya, sehingga mendidihnya selama sebulan. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berehat dengan cara yang cenderung, sedemikian rupa sehingga ada pangkalan mendalam dan bevel pendek.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C Biarkan tenggelam sebelum menanam ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan warna sederhana berwarna ungu merah.

PH akhir medium disediakan ialah 6.7 ± 0.2.

Medium berubah kuning dengan pH sama dengan atau kurang dari 5.2, dan ungu pada pH 6.5 naik.

Kegunaan

Ujian ini, bersama-sama dengan ujian biokimia yang lain, digunakan untuk mengenal pasti bakteria dari keluarga Enterobacteriaceae..

Medium disematkan dengan gelung lurus atau jarum, satu atau dua pukulan dibuat ke bahagian bawah tiub, dan kemudian permukaan medium adalah zigzag.

Ia diinkubasi selama 24 jam pada 35-37 ° C dalam aerobiosis. Sekiranya perlu, ia akan ditenggelamkan selama 24 jam lagi.

Ia amat berguna untuk membezakan spesis laktosa Citrobacter Negatif daripada Salmonellas sp.

Rujukan

  1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Makmal Britania. Lysine iron agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Boleh didapati di: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Boleh didapati di: andinamedica.com