Agar M.R.S asas, penyediaan dan kegunaan



The agar M.R.S. adalah medium budaya pepejal terpilih, yang digunakan untuk pengasingan dan pengiraan bakteria asid laktik, terutamanya genus Lactobacillus. Agar ini dicipta pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, pertengahan yang mempunyai nama yang sama, namun disebabkan kerumitannya singkatan M.R sering digunakan..

Ia terdiri daripada pepton proteose, ekstrak daging, ekstrak yis, glukosa, monooleate sorbitan, fosfat dipotassium, natrium asetat, ammonium sitrat, magnesium sulfat, mangan sulfat dan agar.

Komposisi ini membolehkan perkembangan bakteria asid laktik yang betul dari sampel klinikal, seperti najis, rembesan vagina, sampel lisan dan susu ibu, serta makanan tenusu dan daging..

Ia tidak digunakan secara rutin dalam makmal klinikal, kerana bakteria asid laktik jarang terlibat dalam proses patologi. Bagaimanapun penggunaan masrice M.R adalah lebih kerap dalam bidang mikrobiologi makanan..

Sebaliknya, media ini digunakan oleh beberapa Pusat Penyelidikan yang bertujuan untuk mengkaji bakteria asid laktik.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 Ciri-ciri koloni
    • 3.2 Pengasingan bakteria asid laktik
    • 3.3 Mengira bakteria asid laktik
    • 3.4 Pada peringkat Penyelidikan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Rujukan

Yayasan

Man agar, Rogosa dan Sharpe mempunyai komposisi yang agak kompleks. Dengan memecah fungsi yang setiap komponennya memenuhi, asasnya dapat dijelaskan.

Protein peptone, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa adalah nutrien yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Di samping itu, glukosa adalah sumber tenaga sejagat yang digunakan dalam kebanyakan media kebudayaan.

Sebaliknya, untuk memihak kepada pertumbuhan bakteria asid laktik, kehadiran kofaktor yang tidak diperlukan (kation) dalam metabolisme Lactobacillus dan bakteria yang berkaitan diperlukan; Sebatian ini adalah garam natrium, magnesium dan mangan.

Begitu juga, sorbitan monoleate atau polysorbate 80 adalah sumber asid lemak penting apabila diserap sebagai nutrien.

Di samping itu, sorbitan monoleate dan ammonium citrate bertindak dengan menghalang perkembangan flora yang disertakan, terutamanya bakteria Gram-negatif, yang memberikan sifat terpilih agar ini.

Akhirnya, agar-agar adalah apa yang memberikan konsisten padat kepada medium.

Ada varian lain dari Man Rogosa Sharpe agar; ada yang ditambah dengan cysteine ​​(M.R.S.c), berguna untuk mengasingkan bifidobakteria, antara mikroorganisma lain. Selain itu, terdapat medium MRS ditambah dengan neomycin, paromomycin, asid nalidixic dan litium klorida, terutamanya bagi kiraan terpilih bifidobakteria dalam produk tenusu.

Persediaan

Timbang 68.25 gram medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air sulingan. Biarkan selama 5 minit. Untuk membubarkan keseluruhannya, bawa ke sumber haba yang kacau dan biarkan mendidih selama 1-2 minit. Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Apabila meninggalkan autoclave biarkan berdiri beberapa minit dan mengedarkan lagi panas dalam hidangan petri steril.

Benarkan untuk mengukuhkan dan membalikkan pinggan, memesan dalam plak dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Benarkan plat untuk mengambil suhu bilik sebelum menggunakannya.

PH medium hendaklah 6.4 ± 0.2. Sesetengah rumah komersil mengesyorkan pH antara 5.5 hingga 5.9.

Medium dehidrasi adalah kuning air dan disediakan adalah kuning ambar.

Kedua-dua medium dehidrasi dan plat disediakan hendaklah disimpan pada suhu 2 hingga 8 ° C.

Kegunaan

The agar plate M.R.S. mereka boleh disemai di permukaan (keletihan atau dengan spatula Drigalski). Ia juga boleh disemai dengan kedalaman. Plat hendaklah diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilik (4% O2 dan 5-10% CO2) selama 24 hingga 72 jam.

Kaedah pembenihan dipilih mengikut tujuan yang diusahakan (pengasingan atau penghitungan).

Ciri-ciri jajahan

Koloni-genetik yang menganggap Lactobacillus tumbuh putih dan mempunyai penampilan mucoid atau krim pada agar ini. Kemudian mereka mesti mengenal pasti.

Pengasingan bakteria asid laktik

Untuk tujuan ini, penanaman oleh permukaan digunakan. Sampel yang akan ditanam memerlukan prosedur terdahulu. 

Dalam kes sampel susu, disarankan untuk menumpahkan 1 ml sampel pada 14,000 rmp selama 10 minit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 μl dibuang, dan selebihnya 100 μl sedimen digantung dan dituangkan ke M.R.S. Kemudian ia mestilah diedarkan secara sama rata dengan spatula Drigalski.

Dalam kes sampel najis, satu (1) gram najis ditimbang dan dihomogenkan dalam 9 mL 0.1% air pekat steril, sepadan dengan 1/10 pencairan. Kemudian pencairan siri dibuat, sehingga pencairan akhir 10 diperolehi-4.

Akhirnya, 100 μl daripada pelarutan 10 diambil-2, 10-3 dan 10-4 dan setiap pencairan diturunkan di MRS agar, dengan mengagihkan seragam dengan spatula Drigalski.

Mengira bakteria asid laktik

Dalam kes ini, pembenihan dilakukan dengan kedalaman.

Untuk sampel susu ibu, ambil 1 ml dan letakkan di dalam tiub plastik steril yang steril. Agar MRS ditambah pada suhu kira-kira 40 ° C sehingga volum terakhir 25 mL, mendapatkan campuran homogen. Selepas itu, ia dicurahkan ke dalam hidangan petri steril dengan cara yang seragam dan dibenarkan berdiri sehingga ia menjadi polimer..

Pencairan dibuat untuk sampel najis, seperti yang dinyatakan di atas. Ambil 1 ml setiap pencairan dan letakkan di dalam tiub plastik steril yang steril. Agen MRS molder ditambah kepada volum 25 mL.

Campuran setiap pencairan dicurahkan seragam ke dalam hidangan Petri steril. Akhirnya biarkan ia berdiri sehingga pempolimerannya.

Di peringkat Penyelidikan

Setiap hari kajian bakteria asid laktik menjadi lebih menarik; terutamanya para penyelidik berusaha untuk mengenali strain baru dan potensi mereka sebagai permulaan fermentasi bagi penyeragaman dalam pembuatan produk tenusu, antara kegunaan lain.

Dalam pengertian ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar M.R.S.. untuk menjalankan kajian di mana mereka mengasingkan, mengenalpasti dan mencirikan bakteria asid laktik yang terdapat di dalam artisan merokok keju Venezuelan.

Dalam keju mereka mendapati kehadiran bakteria genus yang Lactococcus dan Lactobacillus, dan membuat kesimpulan bahawa pencilan campuran sesuai sebagai strain starter dalam pembuatan keju dari susu pasteur.

Sebaliknya, Sánchez et al. (2017) menggunakan M.R.S agar. untuk menyiasat kehadiran bakteria asid laktik dalam saluran pencernaan babi, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktiviti babi sihat.

Dengan medium ini mereka berjaya mengasingkan empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.

Begitu juga, Báez et al. (2019) menggunakan M.R.S. agar. untuk menilai bakteria asid laktik (BAL) dan bifidobakteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan najis bayi.

Mereka berjaya mengasingkan 11 BAL dan 3 Bifidobacteria sp dalam susu ibu, dan 8 BAL dan 2 Bifidobacteria sp. dalam najis Semua memenuhi parameter tertentu yang mengakreditasi mereka sebagai bakteria dengan aktiviti probiotik.

Penulis membuat kesimpulan bahawa kedua-dua susu ibu dan kotoran bayi secara eksklusif menyusui berfungsi sebagai sumber semula jadi bakteria probiotik.

Kawalan kualiti

Untuk menilai kualiti M.R tiub kawalan boleh digunakan seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cereus.

Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteria pertama, sementara E. coli dan Bacillus cereus mesti dihalang secara keseluruhannya.

Rujukan

  1. Alvarado C, Chacon Z, Otoniel J, Guerrero B, Lopez G. Pengasingan, Pengenalan dan Pencirian Bakteria Asid Laktik daripada keju Venezuela Artisan Smoked Andino. Penggunaannya sebagai Penanaman Permulaan. Saintis (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Boleh didapati di: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Pengasingan Bakteria Asam Laktik dari saluran pencernaan Piglet. Teruskan penyiasatan. doktor haiwan. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Boleh didapati di: scielo.org.
  3. Baez E, González G, Hernandez G, Lopez E, Mega M. Penilaian bakteria asid laktik dan Bifidobacteria yang berpotensi probiotik dalam susu dan bayi najis payudara di bandar Acevedo, Miranda kerja 2017. Ijazah untuk ijazah graduan Bioanalysis Universiti Carabobo, Venezuela.
  4. Makmal British M.R.S agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  5. Penyumbang Wikipedia. MRS agar Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 10 Januari 2018, 19:44 UTC. Boleh didapati di: wikipedia.org Diakses pada 17 Februari 2019.
  6. Roy D. Media untuk pengasingan dan penghitungan bifidobakteria dalam produk tenusu. Int J Microbiol Makanan, 200128; 69 (3): 167-82.