Asas Agar Müeller Hinton, penyediaan dan kegunaan

The Müeller Hinton agar Ia adalah medium nutrien yang tidak selektif, yang terdiri daripada penyerapan daging, peptone asid kasein, kanji, agar dan air suling. Media ini membolehkan perkembangan mikrob yang sangat baik bakteria yang paling cepat berkembang.

Ia pada asalnya dicipta oleh John Howard dan Jane Mueller Hinton untuk mengasingkan bakteria pemilih dari sudut pemakanan pandangan, kerana Neisseria gonorrhoeae dan Neisseria meningitidis. Walau bagaimanapun, disebabkan ciri-cirinya ternyata sesuai untuk mengkaji kerentanan terhadap antibiotik, memberikan hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan.

Oleh itu, agar Mueller Hinton adalah medium budaya yang diterima oleh Piawaian Klinikal dan Makmal Institute (CLSI) dan Jawatankuasa Eropah mengenai Antimicrobial Mudah mendapat ujian untuk pelaksanaan ujian kecenderungan antimikrob dengan kaedah penyebaran cakera Kirby dan Bauer.

Indeks

• 1 Yayasan
• 2 Persediaan
• 3 Kegunaan
  • 3.1 Teknik antimikrob
  • 3.2 Penempatan cakera strategik pada Müeller Hinton agar
• 4 Sebab-sebab keputusan yang salah
• 5 Had
• 6 Kawalan kualiti
• 7 Rujukan

Yayasan

Kerana ia adalah medium pemakanan yang tidak selektif, ia sangat baik untuk pertumbuhan bakteria yang paling patogen.

Sebaliknya, komposisi mudahnya membuat bahan-bahan mudah tersebar di atasnya, menjadi ciri penting untuk ujian kerentanan oleh kaedah penyebaran cakera..

Satu lagi ciri adalah bahawa ia mengandungi jumlah perencat yang rendah, yang membolehkan sulfonamides, trimethoprim dan tetracyclines dapat dinilai dengan berkesan..

Bagaimanapun, perlu diingat bahawa medium mesti memenuhi syarat-syarat tertentu untuk memastikan berfungsi dengan baik, termasuk:

Pelarasan PH, kedalaman agar dan kepekatan timid yang mencukupi, thymidine, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ dan Zn⁺⁺.

Kita juga harus tahu bahawa metodologi itu bersandar dan oleh itu semua parameter mesti dipenuhi, seperti:

kepekatan inokulum, tumpuan dan pemeliharaan cakera antibiotik, meletakkan bilangan yang sesuai cakera pada agar, jarak antara cakera dan penempatan strategik lain antibiotik tertentu, suasana, suhu dan masa pengeraman.

Persediaan

Timbang 37 gr daripada medium Müeller Hinton yang dehidrasi dan larut dalam 1 liter air sulingan. Panaskan medium sambil kacau untuk membantu membubarkannya. Biarkan mendidih selama 1 minit.

Ambil autoclave untuk sterilkan pada 121 ° C selama 15 minit. Apabila mengeluarkan dari autoklaf, fiola hendaklah diletakkan di dalam air mandi pada 50 ° C untuk menyejukkan. Tuang 25 hingga 30 ml ke dalam hidangan Petri steril 10 cm diameter.

Plat hendaklah ketebalan purata 4 mm (ideal), dengan jarak 3-5 mm dibenarkan.

Sekiranya ia dikehendaki untuk menyediakan darah agar menggunakan asas Müeller Hinton agar, darah kambing 5% steril dan defibrinated dituangkan sebelum disajikan di atas pinggan..

PH akhir medium hendaklah antara 7.2 hingga 7.4.

Melabur dan simpan di dalam peti sejuk, sehingga digunakan. Benarkan plat mengambil suhu bilik sebelum menggunakan.

Warna medium yang disediakan adalah cahaya kuning.

Kegunaan

Ia digunakan untuk melakukan ujian kerentanan antibiotik atau antibiotik kepada kebanyakan patogen yang tidak berkembang pesat.

Jika agar dibekalkan dengan darah, ia berfungsi untuk melaksanakan antibiogram yang memerlukan mikroorganisma seperti: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, antara lain. Ia juga digunakan untuk mengasingkan Legionella pneumophila.

Teknik antibiogram

Sebelum melakukan antibiogram, penyelesaian bakteria bersamaan dengan 1.5 x 10 mesti disediakan⁸ sel.

Untuk melakukan ini, mengambil 3-4 jajahan dari budaya murni dan digantung dalam trypticase soya sup atau Mueller Hinton sup, dieram selama 2-6 jam dan kepekatan telah diselaraskan dengan masin steril, berbanding dengan McFarland taraf 0.5%.

Jika mikroorganisma pemilih dirawat boleh digantung terus jajahan sehingga 0.5% kepekatan MacFarland. Selepas itu, plat pilihan dengan Mueller Hinton impregnated dengan bakteria hisop penyelesaian disediakan.

Untuk tujuan ini, swab dicelup ke dalam larutan tersebut dan kemudian cecair yang berlebihan menekan terhadap dinding tiub dikeluarkan. Sejurus selepas swab itu diluluskan di seluruh permukaan, meninggalkan laman web yang tidak disentuh, maka sedikit berputar plat dan ditanam semula. Operasi diulang 2 kali lagi.

Biarkan selama 10 minit dan kemudian letakkan cakera antibiotik dengan forseps steril, meninggalkan ruang 24 mm di antara mereka. Selepas meletakkan setiap cakera pada agar agar perlahan-lahan masing-masing dengan penjepit untuk memastikan mereka dipatuhi dengan baik.

Selepas proses itu, piringnya terbalik dan diinkubasi pada 35-37 ° C dalam aerobiosis selama 16 hingga 18 jam. Jika ia adalah mikroorganisma menuntut, ia mungkin memerlukan mikroaerofilia dan jika antibiogram mengandungi cakera oxacillin ia harus dibaca pada 24 jam.

Seorang penguasa digunakan untuk mengukur diameter setiap halo. Hasilnya hendaklah direkodkan dalam mm. Maka nilai-nilai yang diperolehi dengan jadual cutoffs diterbitkan oleh pengguna yang mengaitkan CLSI semasa.

Laporkan sebagai sensitif (S), pertengahan (I), atau tahan (R), mengikut mana-mana yang berkenaan.

Antibiotik dipilih mengikut mikroorganisma yang terpencil dan jenis jangkitan yang berlaku.

Kadang-kadang penempatan strategik antibiotik perlu dipertimbangkan untuk menunjukkan corak rintangan fenotip.

Penempatan cakera strategik pada Müeller Hinton agar

Untuk Enterobacteriaceae perlu clavulanate cakera terhadap cephalosporins 3 dan generasi ke-4. Pengembangan berbentuk telur menunjukkan bahawa tekanan yang menghasilkan lanjutan lactamase spektrum beta (ESBLs). Ini bermakna bahawa pesakit tidak boleh dirawat dengan mana-mana cephalosporin.

Di Staphylococcus, penting untuk meletakkan cakera erythromycin atau azithromycin di hadapan cakera clindamycin (Ujian D).

Halo tahan pada eritromisin dan perut di halo clindamycin menunjukkan bahawa ketegangan mempunyai rintangan yang boleh diinduksi kepada clindamycin, strain (RIC). Ini bermakna rawatan dengan clindamycin tidak akan berkesan.

Cari AMP C strain inducible dalam Enterobacteriaceae dan beberapa riba negatif bukan penapaian Gram, cakera ceftazidime, cefoxitin atau piperacillin tazobactam berbanding muka cakera Imipenem pada jarak 27 mm.

Halo yang diratakan di salah satu cakera yang dihadapi imipenem menunjukkan kehadiran AMP C yang dapat diinduksi.

Untuk pencarian untuk AMP C secara konkrit, cakera 500 μg cloxacillin berhadapan dengan ceftazidime (30 μg) dan dengan cefotaxime (30 μg), pada jarak 25 mm. Halo melebar di salah satu daripada cephalosporins menunjukkan positif.

Cak kloxacillin juga boleh digantikan dengan cakera 9 mm of Whatman No. 6 kertas penapis yang diresapi dengan asid fenil boronic (400 μg) dengan jarak 18 mm. Ia ditafsirkan sama seperti sebelumnya.

Akhir sekali, untuk menyiasat pengeluaran metallo-beta-lactamases, terutamanya dalam Pseudomonas aeruginosa, cakera impregnated digunakan dengan 10 .mu.l asid atelindiamintetrasetik (EDTA 750 g) dan asid thioglycolic (SMA 300 mg), yang menghadapi Imipenem dan Meropenem cakera, pada jarak 15 mm.

Ujian ini adalah positif jika terdapat pelebaran imipenem atau meropenem hampir ke cakera EDTA / SMA. Keputusan ini mesti disahkan oleh ujian Hodge diubah suai.

Kaedah ini merangkumi ketegangan Escherichia coli ATCC 25922 pada plat Müeller Hinton. Satu cakera imipenem diletakkan di tengah plat dan kemudian seruling dibuat dari cakera ke arah pinggir dengan ketegangan P. aeruginosa tersangka Anda boleh menguji sehingga 4 strain setiap plat.

Ujian akan positif jika terdapat zon penyimpangan imipenem halo di sekitar stria.

Punca keputusan yang salah

-Cakera antibiotik yang tidak dipelihara dapat menghasilkan resistensi palsu. Sebagai contoh, cakera oxacillin sangat terdedah kepada perubahan suhu.

-A pH medium di bawah (asid) yang ditunjukkan menghasilkan halos lebih kecil dalam aminoglycosides dan macrolides (risiko rintangan palsu), dan halos lebih besar penicillin, tetracycline dan novobiocin (risiko sensitiviti palsu).

-Sekiranya pH di atas ditunjukkan (alkali), kesan yang dijelaskan di atas dibalikkan.

-Media dengan kadar timim dan thymidine yang tinggi mempengaruhi pengurangan ketara halo sulfonamides dan trimethoprim.

-Kepekatan tinggi kalsium dan magnesium menghasilkan rintangan palsu aminoglikosida, polimeroksin B dan tetracyclines terhadap strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kepekatan rendah kalsium dan magnesium menghasilkan sensitiviti palsu aminoglikosida, polimeroksin B dan tetracyclines terhadap strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kehadiran zink mempengaruhi hasil cakera carbapenems (Imipenem, Meropenem dan ertapenem).

-Ketebalan medium di bawah 3 mm menghasilkan hasil sensitif palsu, manakala ketebalan di atas 5 akan menghasilkan ketahanan palsu.

-Pengerasan cakera di antibiogram akan memberikan hampir cacat, sejak pembuangan antibiotik segera.

- Inokulum yang sangat lemah menjejaskan hasilnya, kerana tidak akan ada pertumbuhan seragam atau konvensional dalam agar, suatu syarat yang diperlukan untuk dapat mengukur zon pencerobohan, sebagai tambahan kepada hakikat bahawa halo dapat memberi lebih besar dari normal.

-Inocula yang berlebihan boleh memberi halo lebih kecil daripada biasa.

-Tidak menghormati jarak antara cakera menyebabkan satu halo untuk bertindih yang lain dan tidak boleh dibaca dengan betul.

-Inkubasi dengan CO₂ meningkatkan saiz hampir tetracycline dan methicillin disks.

-Inkubasi pada suhu di bawah 35 ° C menghasilkan halo yang lebih besar.

-Penambahan darah menurunkan saiz halo sulfonamides.

Had

Kepekaan antibiotik yang ditunjukkan dalam antibiogram terhadap mikroorganisma (dalam vitro) bukan jaminan bahawa ia akan berfungsi dalam vivo.

Kawalan kualiti

Untuk mengetahui jika medium mengandungi jumlah timun yang betul, ketegangan perlu disemai daripada Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan menguji kecenderungan untuk trimethoprim sulfamethoxazole (SXT), ia harus memberikan halo sama atau> 20 mm untuk memuaskan.

Rujukan

1. "Agar Müller-Hinton." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 16 Nov 2018, 12:23 UTC. 27 Jan, 2019, 04:22
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
3. Cona E. Syarat untuk kajian kerentanan yang baik dengan ujian penyebaran agar. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory. Müeller Hinton agar dengan darah domba sebanyak 5%. 2009. Boleh didapati di: http://f-soria.es
5. BD Müeller Hinton II Agar makmal. 2017. Boleh didapati di: .bd.com
6. Makmal Britania. Müeller Hinton agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas jenis AmpC: Umum dan kaedah pengesanan fenotip. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2009; 29 (2): 78-83. Boleh didapati di: scielo.org.
9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Pengesanan phenotypic metallobetalactamases dalam isolat klinikal Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121. Boleh didapati di: scielo.org.