Asas asas, penyediaan dan penggunaan Papa



The papa dextrose agar ia adalah medium budaya berkhasiat yang tidak terpilih. Ia boleh tumbuh spesies bakteria dan kulat, tetapi penggunaannya ditunjukkan terutama untuk pengasingan kulat filamen dan ragi. Ia juga dikenali sebagai medium PDA oleh ungkapan Inggeris Potato Dextrose Agar.

Ia amat berguna untuk mengasingkan kulat phytopathogenic, iaitu, yang mempengaruhi tumbuhan. Untuk menanam sampel dari tumbuhan yang dijangkiti, media lain seperti Sabouraud agar atau malta agar dapat digunakan, bagaimanapun, untuk penggunaan rutin, agar kentang dextrose agar lebih disukai kerana sporulasi yang lebih besar..

Ia juga digunakan untuk menghitung koloni kulat dalam sampel kosmetik, farmaseutikal dan beberapa makanan tenusu. Begitu juga, ia adalah sesuai untuk menanam sampel pengikatan kulit untuk mencari dermatophytes, yang tumbuh dengan baik dalam medium ini, mengembangkan pigmen ciri-ciri mereka.

Medium dextrose kentang adalah sangat mudah dan mudah disediakan di makmal. Ia mengandungi, seperti namanya, infusi kentang, dextrose dan agar-agar. Bahan penghalang tambahan boleh ditambah untuk mencegah pertumbuhan bakteria dan meningkatkan selektiviti bagi spesies kulat.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
    • 2.1 - Penyediaan dadah dextrose buatan sendiri (bukan komersil) buatan sendiri
    • 2.2 - Penyediaan komersial papa dextrose agar
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 Proses untuk menanam sampel tumbuhan pada agar kentang dextrose
    • 3.2 Proses penanaman sampel kulit, rambut atau skala kuku pada agar dextrose papa
    • 3.3 Prosedur pengenalpastian
    • 3.4 Kiraan Colony
    • 3.5 Penyelenggaraan strim kulat
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Rujukan

Yayasan

Papa dextrose agar adalah medium budaya yang menyediakan unsur-unsur pemakanan yang diperlukan untuk perkembangan kulat filamen dan ragi.

Gabungan infusi kentang dengan glukosa menyediakan sumber tenaga yang sempurna untuk pertumbuhan kulat yang memuaskan. Sedangkan agar adalah salah satu yang memberikan konsistensi kepada alam sekitar.

Medium ini sahaja tidak menghalang pertumbuhan bakteria, jadi ia adalah medium yang tidak selektif. Untuk menjadikannya selektif anda memerlukan penambahan bahan-bahan penghalang seperti asid tartaric atau antibiotik.

Persediaan

-Penyediaan buatan sendiri (bukan komersil) buatan dextrose kentang

Hidangan Petri

Ia disediakan dengan cara berikut:

Pertama sekali, kentang dibasuh dengan baik, mengeluarkan kotoran yang mereka ada. Mereka dipotong ke dalam kepingan nipis dengan segala-galanya dan kulit. 200 g kentang ditimbang dan diletakkan untuk mendidih dalam satu liter air suling selama setengah jam.

Selepas masa itu ditapis atau tegang semua penyediaan melalui kasa.

Cecair yang diperolehi siap dengan air suling sehingga mencapai satu liter. Untuk penyerapan, 20 g agar-agar dan 20 g dextrose ditambah, dicampur dengan baik dan autoklaf pada 121 ° C, pada 15 pound tekanan selama 15 minit.

Biarkan sejuk hingga 50 ° C dan berkhidmat dalam hidangan Petri steril. Plat disediakan dalam peti sejuk.

Wedges

Anda juga boleh menyiapkan papa dextrose agar wedges.

Dalam kes ini, sebelum sterilisasi dalam autoklaf, 12 hingga 15 ml medium diletakkan di dalam tiub, maka ia akan diautoklasikan dan meninggalkannya di atas sokongan khas sehingga dikuatkan. Simpan di dalam peti sejuk.

Medium ini kekal pada pH 5.6 ± 0.2, bagaimanapun, sesetengah makmal menambah 10% asam tartarat untuk menurunkan pH kepada 3.1 ± 0.1 untuk menghalang pertumbuhan bakteria.

Dalam erti kata yang sama, makmal lain memilih untuk menambah antibiotik untuk menjadikannya selektif untuk penanaman kulat dan mencegah perkembangan bakteria.

-Penyediaan komersial tepung dextrose kentang

Timbang 39 g medium dehidrasi yang tersedia secara komersil dan larut dalam satu liter air sulingan. Biarkan berehat selama 5 minit.

Campuran dipanaskan dengan kerap dikacau sehingga pembubaran totalnya. Selepas itu disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Plat atau baji boleh disediakan. Teruskan seperti yang diterangkan di atas.

PH kekal pada 5.6 ± 0.2. Jika pH 3.1 dikehendaki, 14 ml 20% asid tartaric steril perlu ditambah sebelum berkhidmat di atas pinggan..

Warna medium yang tidak siap adalah kuning air dan disediakan adalah ambar ringan dengan penampilan yang sedikit mendung atau telus.

Kegunaan

Proses untuk menanam sampel tumbuhan dalam agar kentang dextrose agar

-Untuk daun dengan tempat

Daun dipotong.

Dalam gelas 50cc dengan alkohol 50%, letakkan kepingan daun (kepingan berwarna dan sihat), untuk membasmi permukaan selama 20 hingga 30 saat. Tarik alkohol dan tambahkan 20% sodium hipoklorit selama 40 hingga 50 saat jika ia adalah daun nipis dan tambahkan masa untuk 80 saat jika kayu dan balak.

Tariklah hipoklorit natrium dan ambil dengan klip steril potongan-potongan yang disinfeksi dan letakkannya di atas permukaan medium (maksimum 10 keping). Letakkan tarikh dan tenggelam dari 20 hingga 30 ° C.

-Untuk buah-buahan dan ubi

Jika buahnya berisi, buka buah yang terkena kulat dan ambil kepingan dengan pisau bedah steril, kedua-dua bahagian yang sakit dan bahagian yang sihat dan letakkan di atas permukaan agar.

Jika buahnya sitrus, seperti lemon atau oren, anda perlu membuka dan menyemai benih anda.

Apabila permukaan buah dipengaruhi dan spora diperhatikan, lebih baik menggunakan kaedah parut di atas pinggan; ini terdiri daripada menyentuh spora dengan spatula dalam bentuk "L" disterilkan dan disejukkan, dan kemudian melakukan penanaman zigzag 2 hingga 3 kali pada agar.

-Untuk bijirin

Mereka dibasmi kuman seperti yang digambarkan di dalam daun dan kemudian diletakkan di atas agar.

-Untuk cawangan dan batang

Pengikatan kulit dilakukan dan kemudian bahagian-bahagian yang sihat dan berpenyakit diambil dan disemai terus pada agar..

Plat yang disemai diinkubasi dalam aerobiosis pada 20-30 ° C selama 72 jam.

Proses penanaman sampel kulit, rambut atau kuku pada aroma dextrose papa

Sampel harus diambil menggunakan pisau pisau pisau No. 11, sama ada untuk memotong rambut yang terkena, serpihan kulit atau kuku untuk mencari dermatophytes. Sebelum mengambil sampel, kawasan itu perlu dibasmi kuman dengan alkohol 70%.

-Sampel kulit

Dalam lesi yang bersisik, pinggir luka itu perlu dikikis, kerana terdapat lebih banyak cendawan.

Dalam lesi exudative sampel diambil dengan swab kering atau basah. Sapukan segera pada tepung dextrose kentang atau Sabouraud agar. Elakkan cara pengangkutan.

Kaedah pensampelan lain adalah melalui teknik persegi karpet Mariat dan Adan Campos. Dalam kes ini, kawasan yang terjejas digosok 5 kali dengan sebatian bulu steril untuk penanaman lanjut.

Sampel boleh diletakkan terus dalam medium budaya.

-Sampel rambut

Bergantung pada patologi, bahagian yang terjejas boleh dipotong atau dipotong oleh akarnya. Letakkan sampel dalam medium budaya.

-Sampel fingernail

Anda boleh mengikis atau memotong bahagian tertentu kuku yang terjejas. Ia bergantung kepada jenis kecederaan.

Potong sampel ke dalam 1 mm keping sebelum menyemai untuk meningkatkan kemungkinan kenalan kulat dengan media kultur.

Prosedur pengenalan

Tanah jajahan yang diperolehi di dalam piring diasingkan dalam tiub yang mengandungi tepung dextrose kentang untuk menjalankan kajian makroskopik koloni (penampilan, warna, konsistensi, tahap perkembangan)..

Kajian mikroskopik (pemerhatian struktur dan pembentukannya), boleh dilakukan oleh mikrokultur atau pemerhatian langsung di bawah mikroskop antara lamina dan lamella.

Kiraan Colony

Media ini juga boleh digunakan untuk menentukan beban kulat dan ragi yang terdapat dalam sampel tumbuhan, makanan, kosmetik atau ubat. Untuk tujuan ini, papa dextrose agar ditambah dengan antibiotik digunakan, seperti: (chloramphenicol, chlorotetracycline atau kedua-duanya).

Tuang 1 ml sampel - sebaiknya dicairkan - ke dalam hidangan petri steril dan kosong, kemudian cairkan tepung dextrose agar kentang dan biarkan sejuk hingga 45 ° C. Tuangkan hidangan petri dan putar sehingga homogenisasi. Biarkan ia berehat sekalipun.

Inkubasi dalam aerobiosis pada 20-25 ° C (acuan) atau pada 30-32 ° C (yis) selama 5 hingga 7 hari atau lebih, bergantung kepada jenis cendawan yang dicari dan jenis sampel. Dua plat boleh digunakan untuk mengeram dalam kedua-dua julat suhu.

Penyelenggaraan strain kulat

Papa dextrose agar boleh digunakan untuk mengekalkan strain kulat yang sesuai untuk beberapa tahun.

Untuk melakukan ini, kulat ditanam dalam papa dextrose agar irisan dan apabila kulat ditanam, ia ditutup dengan minyak mineral. Minyak mestilah disterilkan dalam autoklaf selama 45 minit, dan mempunyai kelikatan kira-kira 300 hingga 330 Saybolt. Minyak itu harus melebihi hujung serat oleh 1 hingga 2 cm.

Kawalan kualiti

Dari setiap plat disediakan satu atau dua plat harus diambil dan diinkubasi pada 25 ° C selama 48 jam atau pada 20 ° C selama 96 jam. Kawalan steril yang baik adalah salah satu di mana tidak ada perkembangan koloni.

Juga dikenal pasti atau disahkan kawalan seperti:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Mentagrophy Trichophyton ATCC 9533. Dalam semua keadaan, pertumbuhan yang baik dijangka.

Rujukan

  1. Makmal Britania. Papa glucosado agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Kentang Dextrose agar. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  3. Makmal Insumolab Kentang dextrose kentang. Boleh didapati di: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Umumnya Mycology. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, edisi Perpustakaan. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Penilaian Kualiti Mikrobiologi dalam Pembayang Mata, Serbuk Kompak Jenis Makmal Pengeluaran Nasional, mengikut Kaedah Rujukan Pharmacopeia Usp 2005. Tesis untuk memenuhi syarat untuk gelaran Ahli Kimia Farmasi. Universidad de San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Pemprosesan sampel permukaan. Majalah Mycology Iberoamerican. 2007; pp. 1-12