Asas Agar Sabouraud, penyediaan dan kegunaan



The Sabouraud agar, Juga dikenali sebagai Sabouraud dextrose agar, ia adalah medium budaya padat, terutama diperkaya untuk pengasingan dan perkembangan kulat, seperti ragi, acuan dan dermatophytes..

Oleh itu, ini tidak boleh kurang dalam makmal mikrobiologi untuk menyiasat kehadiran kulat patogenik atau oportunistik, sama ada dari sampel klinikal atau bukan klinikal. Begitu juga, ia juga sesuai untuk pertumbuhan bakteria filamen seperti Streptomyces dan Nocardia. Penggunaannya sangat luas, ia boleh digunakan dalam mikologi manusia, haiwan, tumbuhan dan industri.

Media ini dicipta pada tahun 1896 oleh dermatologi terkenal Raimond Sabouraud, yang menjadi ahli terkenal di dunia dalam masalah kulit kepala, yang disebabkan oleh dermatophytes..

Penciptaannya adalah sangat penting bahawa ia telah digunakan sejak itu dan ia terus hari ini, walaupun dengan beberapa pengubahsuaian.

Walaupun ia khusus untuk kulat, dalam bakteria sederhana ini dapat tumbuh, oleh sebab itu untuk sampel dengan campuran flora memerlukan kemasukan antibiotik dalam persiapan mereka dan dengan demikian menghambat pertumbuhan flora bakteria yang mungkin ada.

Pilihan antibiotik perlu dibuat dengan berhati-hati dan mengambil kira jenis kulat yang anda ingin pulih, kerana sesetengahnya dihalang dengan adanya bahan-bahan tertentu.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kebanyakan gabungan kombinasi sabouraud dextrose agar dengan antibiotik
  • 2 Persediaan
    • 2.1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (Modifikasi Emmons)
    • 2.3 Sabouraud dextrose agar (pengubahsuaian Emmons) dengan kloramfenikol
    • 2.4 Dextrose Sabouraud Emas agar dengan sikloheximide
    • 2.5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) dengan kloramfenikol dan sikloheximide
    • 2.6 Antibiotik lain yang boleh ditambah
  • 3 Pertimbangan khusus
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Kegunaan
    • 5.1 Penanaman utama
    • 5.2 Sporulation
    • 5.3 Pemuliharaan
    • 5.4 Mikrobiologi
    • 5.5 Dalam mekologi manusia
    • 5.6 Mycology haiwan
    • 5.7 mycology alam sekitar
    • 5.8 Mycology industri
    • 5.9 Molekul mycology
  • 6 Rujukan

Yayasan

Sederhana Sabouraud dextrose agar adalah dalam penggubalan asalnya adalah lemah terpilih, kerana pH asid 5.6 ± 0.2, namun masih bakteria boleh berkembang, terutama di incubations berpanjangan.

Medium ini mengandungi peptone kasein dan tisu haiwan pankreas yang dicerna, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk perkembangan mikroorganisma.

Ia juga mengandungi kepekatan glukosa yang tinggi, yang bertindak sebagai sumber tenaga, memihak kepada pertumbuhan kulat terhadap bakteria. Semua bercampur dengan agar-agar, komponen yang menyediakan konsistensi yang betul.

Sebaliknya, sabouraud dextrose agar mungkin selektif jika antibiotik ditambah.

Dengan antibiotik ia amat berguna dalam sampel luka, ulser terbuka atau sebarang sampel di mana pencemaran bakteria yang besar disyaki.

Gabungan paling banyak digunakan Sabouraud dextrose agar dengan antibiotik

-Sabouraud agar dengan kloramfenikol: sesuai untuk pemulihan ragi dan kulat filamen.

-Sabouraud agar dengan gentamicin dan chloramphenicol: dengan cara ini berkembang paling kulat berfilamen dan yis, dan menghalang sejumlah besar bakteria, termasuk Enterobacteriaceae, Pseudomonas dan Staphylococcus.

-Sabouraud agar dengan sikloheximide: ia amat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernafasan, selagi kecurigaan adalah jamur dimorphik.

Sikloheximide harus digunakan dengan berhati-hati; Walaupun ia digunakan untuk menghalang pertumbuhan kulat dan ragi bukan patogen atau lingkungan yang boleh hadir sebagai bahan pencemar dalam sampel, ia juga menghalang pertumbuhan beberapa kulat seperti Neoformans Cryptococcus,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp dan kulat oportunistik lain.

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol ditambah sikloheximide: digunakan terutamanya untuk mengasingkan dermatophytes dimorphic dan kulat. Ia mempunyai kelemahan yang menghalang beberapa spesies kulat oportunistik sebagai Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes atau C. neoformans.

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol, streptomycin, penisilin G dan cycloheximide: sesuai untuk membeli sampel tercemar dengan bakteria dan kulat saprophytic, tetapi mempunyai kelemahan yang menghalang pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, sebagai tambahan kepada cendawan oportunis yang disebutkan di atas.

Persediaan

Jika anda mempunyai bahan-bahan secara berasingan anda boleh menyediakannya dengan cara berikut:

Dextrose agar Sabouraud 

Timbang:

- 40 gr dextrose

- 10 g peptone

- 15 gr agar-agar

- Ukur 1000 ml air sulingan

Semua ramuan bercampur, pH diselaraskan kepada 5.6. Larutkan larut dengan mendidih, mengedarkan 20 ml medium dalam tiub 25 x 150 mm, tanpa flange dan dengan kapas terlebih dahulu disukai.

Saiz tiub lain juga boleh digunakan, bergantung kepada ketersediaan.

Mereka adalah autoklaf selama 10 minit pada suasana tekanan (121 ° C). Jangan melebihi masa autoklaf. Apabila meninggalkan autoklaf, tiub akan dimiringkan dengan sokongan sehingga ia menguatkan pada puncak seruling..

Cara lain ialah membubarkan bahan-bahan dengan memanaskan sehingga mendidih. Dalam fiola autoklaf yang sama selama 10 minit dan kemudian mengedarkan 20 ml dalam hidangan Petri.

Jika Sabouraud dextrose agar medium tersedia, yang sudah mengandungi semua ramuan, kami akan menimbang jumlah yang ditentukan oleh rumah komersial untuk satu liter air. Selebihnya langkah-langkah yang sama seperti yang diterangkan di atas.

Dextrose agar Sabouraud (pengubahsuaian Emmons)

Timbang:

-  20 gr dextrose

- 10 g peptone

-  17 gr agar-agar

-  Ukur 1000 ml air sulingan

Semua ramuan bercampur, pH diselaraskan kepada 6.9. Teruskan dengan cara yang sama seperti dalam kes sebelumnya.

Terdapat rumah-rumah komersil yang menawarkan medium dengan semua ramuan. Dalam kes ini, timbang dan sediakan seperti yang diterangkan dalam sisipan.

Sabouraud dextrose agar (pengubahsuaian Emmons) dengan kloramfenikol

Penyelesaian stok Chloramphenicol

- Berat 500 mg asas kloramfenikol

- Ukur 100 ml etanol 95%

- Campurkan

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) disediakan seperti yang diterangkan di atas dan, tambahannya, bagi setiap liter medium, tambah 10 ml larutan stok chloramphenicol sebelum autoklaf..

Dextrose agar Sabouraud Emmons dengan sikloheximide

Penyelesaian stok sikloheximide

- Timbang 5 gr sikloheximide

- Ukur 100 ml aseton

- Campurkan

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) disediakan seperti yang telah digambarkan dan tambahan untuk setiap liter menambah 10 ml larutan stok sikloheximide sebelum autoclaving.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan chloramphenicol dan sikloheximide

Sabouraud sederhana dextrose agar (Emmons) ini disediakan seperti yang telah diterangkan dan seterusnya setiap liter medium menambah 10 ml larutan stok chloramphenicol dan 10 ml larutan stok cycloheximide sebelum autoklaf.

Antibiotik lain yang boleh ditambah

20,000 hingga 60,000 unit penisilin setiap liter sederhana.

Streptomycin 30 mg seliter dalam medium.

Kedua-duanya harus dimasukkan selepas autoclaving medium, sedikit disejukkan (50-55 ° C).

0.04 g neomycin seliter sederhana.

0.04 g gentamicin seliter sederhana.

Pertimbangan khusus

Untuk keselamatan adalah tumbuhan pilihan Sabouraud dextrose agar dalam tiub berbentuk baji (cenderung seruling puncak) dan bukannya dalam hidangan petri, untuk mengelakkan penyebaran dan penyedutan spora.

Adalah penting bahawa tiub dengan Sabouraud agar dilapisi dengan kapas dan tidak dengan topi skru, kerana telah menunjukkan bahawa keadaan semianaerobic menghalang pembentukan spora dalam beberapa strain, sebagai contoh Coccidioides immitis. Di samping itu, kebanyakan kulat adalah aerobik.

Jika menggunakan topi skru, jangan tutup rapat.

Kawalan kualiti

Media yang disediakan mesti mempunyai kawalan mutu untuk mengesahkan fungsi mereka yang sesuai. Untuk tujuan ini, strain kawalan tertentu akan disemai.

Untuk sabouraud dextrose agar dengan tiang kloramfenikol ATCC boleh digunakan. Candida albicans, yang mesti mempunyai pertumbuhan yang sangat baik. Plat lain disuntik dengan strain daripada Escherichia coli, mesti dihalang sepenuhnya.

Plat tidak dinamai diinkubasi di mana tiada mikroorganisma perlu berkembang.

Sabouraud dextrose agar dengan chloramphenicol dan sikloheximide boleh digunakan strain  Mentagrophy Trichophyton, mesti berkembang dengan baik. Satu lagi plat disuntik dengan ketegangan Aspergillus flavus, di mana perlu ada sedikit pertumbuhan atau tiada pertumbuhan. Di samping itu, satu plat tidak dinamai diinkubasi untuk menunjukkan kemandulannya.

Untuk sabouraud dextrose agar dengan sikloheximide, strain Candida albicans, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, yang sepatutnya menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Begitu juga, ketegangan Aspergillus flavus, menunjukkan pertumbuhan kurang atau tiada pertumbuhan. Akhirnya mengepam plat tak ditakdirkan untuk mengawal kemandulan.

Kegunaan

Penanaman pokok

Sabouraud klasik dextrose agar mengandungi 4 gram dextrose dan sangat baik sebagai medium pengasingan utama, kerana ia menunjukkan ciri morfologi setiap jamur.

Ia juga sangat baik untuk menunjukkan pengeluaran pigmen. Walau bagaimanapun, ia bukan cara yang paling sesuai untuk memerhatikan sporulasi.

Ia juga tidak disyorkan untuk berkembang Blastomyces dermatitidis, yang terhalang oleh kepekatan glukosa yang tinggi.

Sebaliknya, pertimbangan tertentu mesti diingat untuk penanaman.

Sesetengah kulat berkembang dengan lebih baik pada suhu bilik, seperti acuan, yang lain berkembang dengan jayanya pada suhu 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan lain-lain boleh berkembang pada kedua-dua suhu (korpi dimorphic).

Atas sebab ini, ia kadang-kadang perlu menggunakan beberapa plat agar Sabouraud untuk sampel yang sama, kerana ia sering ditanam dalam pendua untuk mengepam satu plat pada suhu bilik dan plat lain pada 37 ° C..

Contohnya, Sporothrix schenckii ia disematkan dalam dua pinggan; satu diinkubasi pada suhu bilik untuk memperoleh fasa acuan dan yang lain diinkubasi pada 37 ° C untuk memperoleh fasa seperti yis, tetapi di kemudiannya perlu menambahkan 5% darah ke medium.

Dalam kes lain, seperti dalam contoh mycetomas, dua plat Sabouraud agar ditaburkan, satu dengan chloramphenicol dan satu lagi dengan sikloheximide. Yang pertama akan membolehkan pertumbuhan agen penyebab mycetoma dari kulat asal (Eumicetoma) dan agen penyebab mikrob yang kedua dari bakteria asal, seperti actinomycetomas..

Sporulation

Dextrose Sabouraud agar diubahsuai oleh Emmons mengandungi 2 gram dextrose dan bukan hanya digunakan untuk pengasingan, tetapi juga untuk sporulasi dan pemuliharaan kulat.

Dalam medium ini jika anda boleh memulihkan strain Blastomyces dermatitidis.

Pemuliharaan

Untuk mengekalkan budaya kulat boleh disimpan dalam peti sejuk (2-8 ° C). Waktu penyimpanan boleh berubah antara 2 hingga 8 minggu. Selepas masa ini mereka mesti subkultur untuk mengulangi proses tersebut.

Sesetengah kulat paling baik dikekalkan pada suhu bilik, seperti Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum dan Microsporum audounii.

Penyelenggaraan terikan boleh dipanjangkan untuk mengelakkan pleomorphism jika dextrose sepenuhnya dikeluarkan dari agar dan jika jumlah agar dalam medium dikurangkan untuk mengelakkan kekeringan.

Microcultures

Untuk pengenalpastian beberapa kulat filamen diperlukan untuk menjalankan mikrokultur menggunakan Sabouraud agar atau cara khas lain untuk memerhatikan struktur pembiakan seksual dan aseksual.

Dalam mekologi manusia

Ia digunakan terutamanya untuk diagnosis penyakit kulat, terutama yang mempengaruhi kulit dan lampirannya (rambut dan kuku).

Sampel ini boleh menjadi rembesan, eksudat, kulit, rambut, kuku, kuman, CSF atau air kencing. Patogen yang sering diasingkan ialah dermatophytes, kulat yang menyebabkan infeksi kulat subkutaneus dan sistemik.

Mycology haiwan

Haiwan sering terjejas oleh jangkitan kulat, jadi Sabouraud agar adalah seperti yang berguna dalam haiwan seperti dalam mitokologi manusia..

Sebagai contoh, dermatophytes sering boleh menjejaskan haiwan. Ini adalah kes Microsporum canis var distortum, yang kerap menjejaskan anjing, kucing, kuda, babi dan monyet. Begitu juga, Microsporum gypseum menjangkiti anjing, kucing dan lembu.

Burung seperti ayam, ayam dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.

Cendawan lain, seperti Zymonema farciminosum, mereka juga merupakan penyebab penyakit pada haiwan, terutamanya dalam kuda, bagal dan keldai, menghasilkan keradangan yang penting dalam saluran limfa.

Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum menjejaskan haiwan domestik dan manusia.

Mycologi alam sekitar

Banyak kulat patogenik atau oportunis boleh tertumpu di mana-mana masa tertentu dalam persekitaran tertentu, terutamanya dalam bilik operasi dan Unit Rawatan Rapi (ICU) klinik dan hospital. Oleh itu, adalah perlu untuk mengawalnya.

Ruang rentak yang lain adalah perpustakaan dan bangunan lama, yang boleh dipengaruhi oleh kepekatan kulat alam sekitar.

Dalam kajian alam sekitar Sabouraud dextrose agar digunakan untuk pengasingan kulat.

Mycology industri

Sabouraud dextrose agar tidak boleh hilang untuk mengkaji pencemaran jamur dalam pengeluaran kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, antara lain.

Mycology loji

Tumbuh-tumbuhan juga mengalami penyakit yang disebabkan oleh kulat, yang mempengaruhi bahagian-bahagian tumbuhan yang berbeza, yang boleh menamatkan panen, menyebabkan kerugian besar dalam pertanian.

Rujukan

  1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Diagnosis mikrobbiologi mikroskop dan kajian sensitiviti terhadap antijamur. Cadangan Persatuan Penyakit Berjangkit Sepanyol dan Mikrobiologi Klinikal. Boleh didapati di: coesant-seimc.org
  2. Makmal ValteK. (2009). Sabouraud dextrose agar dengan sikloheximide. Boleh didapati di: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Mycology veterinar. Universiti Agrarian Negara. Nicaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial
  5. Casas-Rincon G. Umumnya Mycology. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, edisi Perpustakaan. Venezuela, Caracas.