Agar asas darah, kegunaan dan penyediaan

The darah agar ia adalah medium pepejal diperkaya, pembezaan tetapi tidak selektif. Ia digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan pelbagai mikroorganisma daripada sampel klinikal atau subkultur.

Agar darah klasik harus dimasukkan untuk pembenihan sampel klinik yang paling banyak yang diterima di makmal; kecuali untuk sampel najis di mana ia tidak berguna, melainkan jika disediakan dengan pengubahsuaian tertentu.

Media budaya ini pada dasarnya terdiri daripada agar asas diperkaya dan darah 5%. Asas agar dapat bervariasi sesuai dengan keperluan, tetapi terutama akan terdiri dari peptones, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain.

Bagi darah, biasanya diperlukan untuk bersentuhan dengan bioterium untuk mendapatkan darah dari haiwan, seperti domba, arnab atau kuda. Walau bagaimanapun, ini tidak selalu mungkin dan kadang-kadang darah manusia digunakan.

Medium agar darah boleh disediakan di makmal atau boleh dibeli siap untuk syarikat yang berdedikasi. Penyediaan medium ini adalah salah satu yang paling halus, apa-apa kecerobohan dalam penyediaannya akan menyebabkan kumpulan yang tercemar.

Itulah sebabnya semua langkah berjaga-jaga yang perlu diambil dan pada akhirnya kawalan mutu harus dilakukan di inklusi pada plat 37 ° C 1 untuk setiap 100 yang disediakan.

Indeks

• 1 Yayasan
• 2 Kegunaan
  • 2.1 Pilihan jenis darah
  • 2.2 Pilihan asas agar jenis
  • 2.3 Penggunaan agar darah mengikut medium asas yang digunakan untuk penyediaannya
• 3 Persediaan
  • 3.1 Timbang dan larut
  • 3.2 mensterilkan
  • 3.3 Agregasi darah
  • 3.4 Tuangkan ke dalam pinggan Petri
• 4 Rujukan

Yayasan

Telah disebutkan bahawa agar agar darah mempunyai sifat menjadi medium diperkaya, berbeza dan tidak selektif. Ruang bawah tanah setiap sifat ini dijelaskan di bawah.

Agar darah adalah medium diperkaya kerana ia mempunyai darah tambahan 5 -10% pada asas agar. Kedua-dua sebatian mengandungi banyak nutrien dan harta ini membolehkan kebanyakan bakteria yang ditanam tumbuh di dalamnya.

Pertumbuhan itu berlaku tanpa batasan; kerana sebab ini ia tidak selektif. Walau bagaimanapun, jika sebatian ditambahkan ke medium ini yang menghalang pertumbuhan beberapa mikroorganisma dan memihak pertumbuhan orang lain, ia menjadi selektif. Inilah yang berlaku jika beberapa jenis antibiotik atau antikulat ditambah.

Begitu juga, agar darah adalah medium perbezaan, kerana ia membolehkan untuk membezakan 3 jenis bakteria: beta-hemolytic, alpha-hemolytic dan gamma-hemolytic..

Beta-hemolitik adalah mereka mempunyai keupayaan untuk Lyse atau memecahkan sel-sel darah merah sepenuhnya, membentuk halo yang jelas di sekitar jajahan, dengan itu menghasilkan hemolisis atau SS -hemólisis dan mikroorganisma ß dipanggil beta-hemolitik.

Contoh-contoh bakteria ß-hemolytic adalah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.

Hemolytic alfa adalah mereka yang melakukan hemolisis separa, di mana hemoglobin dioksidakan ke methemoglobin, menghasilkan warna hijau di sekitar koloni. Fenomena ini dikenali sebagai hemolisis α atau α-hemolisis dan bakteria dikelaskan sebagai α-hemolytic.

Contoh bakteria α-hemolytic adalah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus kumpulan itu Viridans.

Akhirnya, ada bakteria yang disebut hemolisis gamma atau tidak hemolitik. Ini tumbuh di agar tanpa menghasilkan perubahan di atasnya, kesan yang dikenali sebagai γ -hemolisis, dan mikroorganisma adalah γ-hemolytic.

Contoh bakteria γ-hemolytic: beberapa strain Streptococcus kumpulan D (Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis).

Kegunaan

Media agar agar darah adalah salah satu yang paling biasa digunakan dalam makmal mikrobiologi.

Antara mikroorganisma mampu berkembang dalam darah sederhana agar ialah: bakteria aerobik yang ketat, fakultatif, microaerophilic, anaerobik, Gram positif atau bakteria Gram negatif berkembang pesat atau lambat berkembang.

Sesetengah bakteria yang menuntut atau mengganggu dari sudut pandangan pemakanan, serta kulat dan ragi, juga berkembang. Begitu juga, ia berguna untuk subkultur atau mengaktifkan semula strain yang sangat lemah metabolik.

Walau bagaimanapun, pilihan jenis darah dan agar asas berbeza-beza bergantung kepada kemungkinan mikroorganisma yang disyaki pemulihan dan penggunaan dibuat daripada plak (budaya atau antibiogram)..

Pilihan jenis darah

Darah boleh kambing, arnab, kuda atau manusia.

Yang paling disyorkan ialah darah kambing, dengan beberapa pengecualian. Sebagai contoh, untuk mengasingkan spesies Haemophilus, di mana darah disyorkan adalah kuda atau kelinci, kerana darah kambing mempunyai enzim yang menghalang faktor V.

Paling tidak disarankan adalah manusia, namun ia adalah yang paling banyak digunakan, mungkin kerana ia adalah yang paling mudah untuk diperoleh. 

Darah mesti defibrinasi, diperoleh tanpa sebarang jenis aditif dan dari haiwan yang sihat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor mesti diingat:

Jika darah berasal dari individu yang telah mengalami jangkitan bakteria, mereka akan mempunyai antibodi tertentu. Di bawah keadaan ini, pertumbuhan beberapa bakteria mungkin akan menghalang.

Sekiranya ia diperoleh dari bank darah, ia mengandungi sitrat dan ada kemungkinan bakteria tertentu tidak berkembang di hadapannya. Sebaliknya, jika darah berasal dari pesakit yang mengambil antibiotik, pertumbuhan bakteria yang mudah terdedah boleh dihalang.

Dan jika darah itu berasal dari orang kencing manis, glukosa berlebihan mengganggu perkembangan hemolisis yang betul.

Pilihan jenis asas agar

Agar asas digunakan untuk penyediaan agar darah boleh menjadi sangat luas. Antaranya mereka adalah: agar nutrien, otak hati infusi agar, soya agar trypticase, Mueller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, agar Brucella, Campylobacter agar, dan lain-lain.

Penggunaan agar darah mengikut medium asas yang digunakan untuk penyediaannya

Nutrien agar

Asas ini adalah yang paling kurang digunakan, kerana di atasnya akan berkembang bakteria bukan menuntut terutamanya, seperti bacilli enterik, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, antara lain. Ia tidak disyorkan untuk mengasingkan Streptococcus.

Heart Brain Infusion Agar (BHI)

Ini adalah salah satu yang paling digunakan sebagai asas agar darah, kerana ia mempunyai nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria yang paling, termasuk Streptococcus sp dan lain-lain bakteria menuntut. Walaupun tidak sesuai untuk memerhatikan pola hemolisis.

Darah kambing biasanya digunakan dengan pangkalan ini.

Varian agar darah juga boleh disediakan, di mana sebatian lain ditambah untuk mengasingkan mikroorganisma tertentu. Sebagai contoh, infusi jantung otak supaya ditambah dengan darah arnab, sistein dan glukosa, berfungsi untuk mengasingkan Francisella tularensis.

Sedangkan, dengan tellurit sista berguna untuk pengasingan Corynebacterium diphteriae. Anda boleh menggunakan darah manusia atau kambing.

Dengan yang pertama beta-hemolisis akan kelihatan seperti halo sempit, manakala dengan kedua halo akan menjadi lebih luas.

Begitu juga, asas ini bersama bacitracin, kanji jagung, darah kuda dan makanan tambahan pengayaan lain (IsoVitaleX), digunakan untuk pengasingan genus Haemophilus sp daripada sampel pernafasan.

Juga, jika ditambah gabungan antibiotik chloramphenicol - gentamicin atau penisilin - darah kuda streptomycin, ia adalah sesuai untuk pengasingan kulat patogenik mencabar, walaupun prestasi yang membanggakan kepada Sabouraud glukosa agar. Ia amat berguna dalam pengasingan Histoplasma capsulatum.

Kacang soya Tryptive

Pangkalan ini adalah yang paling disyorkan untuk pemerhatian yang lebih baik mengenai pola hemolisis dan prestasi ujian diagnostik seperti taksonomi optoquine dan bacitracin. Ia adalah agar darah klasik yang digunakan secara rutin.

Dengan asas ini, anda juga boleh menyediakan agar agar darah khusus Corynebacterium diphteriae, dengan cystine tellurium dan darah kambing.

Begitu juga, gabungan dari agar ini dengan darah kambing ditambah kanamycin-vancomycin sangat sesuai untuk pertumbuhan anaerobes, terutama Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Asas ini ditambah dengan darah digunakan untuk melaksanakan antibiogram mikroorganisma yang menuntut, seperti Streptococcus sp.

Ia juga berguna untuk pengasingan bakteria seperti Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Media ini sesuai sebagai asas untuk agar darah ketika genus Neisseria disyaki, terutama Neisseria meningitidis, sejak itu N. gonorrhoeae tidak tumbuh pada agar darah.

Ia juga berfungsi untuk melakukan ujian kerentanan kepada Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Asas ini sangat baik untuk sampel pembiakan biopsi lambung untuk mencari Helicobacter pylori.

sederhana ini telah disediakan dengan menambah 7% defibrinated darah domba dengan antibiotik (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B dan cefsulodin) untuk menyekat pertumbuhan bakteria lain yang boleh hadir.

Asas yang sama dengan darah manusia atau kambing, asid nalidixik dan kolistin berguna untuk mengasingkan Gardnerella vaginalis. Ia juga sesuai untuk menilai kecenderungan antimikrob terhadap antibiotik mikroorganisma yang sama.

Di samping itu, ia digunakan untuk penyediaan agar darah untuk penanaman anaerobes, sambil menambahkan aminoglycosides dan vancomycin.

Asas ini membolehkan kita mengamati corak hemolisis dengan betul.

Brucella Agar

Media ini digunakan sebagai asas agar darah bersama dengan penambahan vitamin K sangat sesuai untuk penanaman bakteria anaerobik. Dalam kes ini, penggunaan darah anak domba adalah disyorkan.

Campylobacter agar

Campylobacter agar ditambah dengan 5% darah domba dan lima antibiotik (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B dan vancomycin), adalah medium yang digunakan untuk mengasingkan Campylobacter jejuni dalam sampel najis.

Persediaan

Setiap rumah komersial membawa ke belakang pakej arahan untuk menyediakan satu liter medium budaya. Pengiraan yang sama boleh dibuat untuk menyediakan kuantiti yang dikehendaki, menurut agar asas yang dipilih.

Timbang dan larut

Agar asas datang dehidrasi (serbuk), jadi ia mesti dibubarkan dalam air suling disesuaikan dengan pH 7.3.

Jumlah yang ditunjukkan oleh agar asas terpilih ditimbang dan dibubarkan dalam jumlah air yang sepadan dalam fiola, kemudian dipanaskan kepada haba yang sederhana dan dicampur dengan pergerakan berputar sehingga semua serbuk dibubarkan..

Mensterilkan

Setelah dibubarkan, sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 20 minit.

Agregat darah

Apabila meninggalkan autoclave, biarkan fiola menyejukkan sehingga suhu berayun antara 40 hingga 50 ° C; adalah suhu yang disokong oleh kulit manusia dan pada masa yang sama, agar itu belum dikuatkan.

Untuk ini, fiola disentuh dengan tangan dan jika haba boleh ditoleransi, ia adalah suhu yang ideal untuk menambah jumlah yang sama dengan darah defibrinasi (50 ml per liter agar). Campurkan dengan lembut untuk homogenisasi.

Laluan agregat darah adalah penting, kerana jika ia dilakukan ketika medium sangat panas maka sel-sel darah merah akan pecah dan medium tidak akan berfungsi untuk mengamati hemolisis.

Jika ia ditambah terlalu sejuk, benjolan akan terbentuk dan permukaan medium tidak akan lancar untuk membuat seruling dengan betul.

Tuangkan ke dalam hidangan Petri

Hidangkan dalam hidangan petri steril segera setelah homogenisasi darah. Kira-kira 20 ml dituangkan ke dalam setiap hidangan Petri. Prosedur ini dilakukan dalam hud aliran laminar atau berdekatan dengan lebih ringan.

Apabila menghidangkan kedalam darah dalam hidangan Petri, gelembung udara tidak harus berada di permukaan plat. Sekiranya ini berlaku, api pembakar Bunsen cepat dilepasi di atas pinggan untuk menghapuskannya..

Plat dibenarkan untuk mengukuhkan dan disimpan dalam peti sejuk (2-8 ° C) terbalik sehingga digunakan. Sebelum menggunakan plat agar agar darah harus diabaikan (biarkan mereka mengambil suhu bilik) untuk disemai.

Plat disediakan kira-kira 1 minggu.

Rujukan

1. Bayona M. Keadaan mikrobiologi untuk penanaman Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.
3. "Agar darah." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 10 Dis 2018, 14:55 UTC. 27 Dis 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
5. Pusat Diagnostik Veterinar Makmal CEDIVET. Guatemala Boleh didapati di: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..