Agar asas, penyediaan dan penggunaan TCBS



The TCBS agar adalah medium budaya pepejal yang sangat selektif dan berbeza, digunakan untuk pengasingan dan budaya bakteria Vibrio, terutama Vibrio cholerae, V. vulnificus dan V. parahaemolyticus sebagai patogen utama genus ini.

Akronim TCBS bermakna sukrosa empi thiosulfate sitrat. Agar ini juga dikenali sebagai medium selektif untuk Vibrios. Formula asal dicipta oleh Nakanishi dan kemudian diubahsuai oleh Kobayashi.

Ia terdiri daripada ekstrak yis, daging pepton, trypticase, natrium sitrat, natrium tiosulfat, lembu hempedu, sukrosa, natrium klorida, sitrat ferik, bromothymol biru, thymol biru dan agar.

Komposisi ini membolehkan perkembangan Vibrio yang mencukupi dari air, najis dan sampel makanan; kecuali untuk Vibrio hollisae, yang tidak berkembang dalam medium ini. Di samping itu, medium TCBS mampu menghalang pertumbuhan bakteria yang disertakan, terutamanya koliform.

Oleh kerana masalah gastrousus dan ekstra usus yang teruk, beberapa spesies genus Vibrio menghasilkan, diagnosisnya sangat penting. Manusia dijangkiti terutamanya oleh penggunaan makanan laut mentah atau kurang masak atau air tercemar, tetapi juga melalui jangkitan luka.

Oleh kerana itu, makmal klinikal harus memasukkan TCBS agar dalam kajian kultur najis sampel kotoran cair, terutama dengan penampilan air beras. Terutama jika laporan pesakit telah bersentuhan dengan air laut atau mengonsumsi makanan laut atau ikan.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persediaan
  • 3 Gunakan
  • 4 dibiakkan
  • 5 Had
  • 6 Kawalan kualiti
  • 7 Rujukan

Yayasan

Ekstrak ragi, peptone daging, dan triptein adalah sumber pemakanan media ini. Walau bagaimanapun, agar TCBS adalah medium yang tidak boleh diterima untuk kebanyakan bakteria.

Selektiviti tinggi diberikan oleh penambahan natrium sitrat dan empedu lembu; kedua-duanya adalah agen penghalang yang juga menyediakan pH alkali ke medium, menyekat pertumbuhan flora yang disertakan dan memihak kepada pertumbuhan V. cholerae, antara spesies lain. Perlu diingatkan bahawa Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap pedih ulu hati.

Untuk bahagiannya, natrium klorida mengimbangi secara osmotik ke medium. Di samping itu, kerana kepekatannya tinggi, ia juga bertindak sebagai agen menghalang, memihak kepada pertumbuhan bakteria halofilik.

Sucrose adalah gula fermentable yang bersama-sama dengan petunjuk pH biru bromothymol dan thymol blue memberikan sifat pembezaan kepada medium. Atas sebab ini, dengan cara ini adalah mungkin untuk membezakan strain fermentasi sukrosa daripada strain bukan fermentasi.

Tanah jajahan sukrosa yang menanam strain membentuk warna kuning dan akan menjadikan media dari hijau menjadi kuning disebabkan oleh pengeluaran asid. Para penukar tidak berkembang lentur dan medium tetap warna asal (hijau).

Begitu juga, medium ini mengandungi natrium thiosulfate sebagai sumber sulfur dan sitrat ferum sebagai ejen yang mendedahkan. Kedua-duanya menunjukkan bakteria yang mampu mengeluarkan hidrogen sulfida (gas tanpa warna). The H2S terbentuk daripada thiosulfate dan kemudian bereaksi dengan sitrat ferrilik bentuk endapan hitam yang kelihatan.

Akhirnya, agar adalah apa yang memberikan konsistensi padu kepada medium.

Persediaan

Berat 89 gr medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air sulingan. Bantu pembubaran dengan pemanasan dan keringkasan yang kerap. Campuran boleh direbus selama 2 minit.

Media ini tidak autoklaf. Selepas pembubaran itu disampaikan secara langsung pada plat steril. Apabila menyejukkan, mereka disusun dengan cara terbalik dalam pembuat plak dan disimpan dalam peti sejuk (2-8 ° C) sehingga mereka digunakan.

Peranti selepas penyediaan hendaklah pada pH 8.6 ± 0.2.

Warna media dehidrasi adalah cahaya kuning atau kehijauan hijau, dan warna medium adalah hijau hutan atau hijau kebiruan.

Adalah penting untuk meninggalkan pembajaan pinggan sebelum menyemai sampel.

Guna

Sampel yang paling biasa untuk pengasingan Vibrios adalah najis diare.

Sampel bangkai jika mereka tidak boleh dibuang segera ke medium selektif, mesti diangkut di tengah-tengah Cary Blair.

Untuk meningkatkan sensitiviti tanaman, najis dapat dilalui oleh air pepton ia pada pH 8.4 sebagai medium pengayaan selama 8 jam maksimum, dari situ TCBS sederhana adalah disubkulturkan.

Ia juga harus diingatkan bahawa beberapa jenis Vibrios boleh menyebabkan septikemia dalam pesakit imunosupresi, sehingga mereka dapat diasingkan dari kultur darah. Begitu juga, sampel air dan makanan dari laut boleh dianalisis apabila terdapat wabak penyakit kolera.

Sown

Inokulum sampel di bawah kajian mestilah menonjol, pembenihan dilakukan dengan cara mengatasi kelelahan. Plat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Tanah jajahan yang diandaikan Vibrio cholerae Mereka bersaiz sederhana, licin, legap, dengan tepi nipis dan kuning kerana mereka menapai sukrosa..

Dengan cara yang sama, spesies V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii dan beberapa V. vulnificus. Spesies lain Vibrios secara klinikal penting sebagai V. parahaemolyticus tidak menanam sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.

Selain itu, perlu diingat bahawa sesetengah strain Aeromonas dan Plesiomonas sedang oxidase (+) boleh tumbuh di medium ini, membangunkan jajahan kuning yang boleh mengelirukan doktor. Walaupun beberapa jenis Pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau dan juga V. parahaemolyticus.

Had

Uji oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari TCBS agar, karena hasil yang diperoleh akan menjadi negatif palsu. Sebatian dalam medium ini amat kuat dalam ujian ini. Oleh itu, ia harus dilakukan dari subkultur pada agar darah.

Kawalan kualiti

Untuk membuktikan bahawa medium adalah dalam keadaan baik, adalah dinasihatkan untuk menanam strain kawalan yang dikenali atau diperakui dan memerhatikan jika pertumbuhan memenuhi ciri-ciri yang diharapkan.

Untuk ini, ketegangan:

-Vibrio cholerae - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, sempadan lutut).

-Vibrio parahaemolyticus - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan sempadan lutut).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - pertumbuhan yang memuaskan (koloni berwarna kuning dengan hampir warna yang sama di sekitar tanah jajahan).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - perencatan keseluruhan atau separa (koloni kuning atau lutut kecil).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- perencatan sebahagian atau keseluruhan (koloni biru).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Sepenuhnya menghalang.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Penghambatan keseluruhan atau separa. (Koloni kecil pusat hijau kelebihan tembus).

Inkubasi media tidak ditukar tidak boleh berubah.

Rujukan

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Boleh didapati di: f-soria.es
  2. Makmal BD. BD. TCBS Agar 2003. Boleh didapati di: bd.com
  3. Makmal Britania. TCBS Medium. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  4. Makmal Acumedia TCBS Agar. 2016. Boleh didapati di: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.