Asas, penyediaan dan kegunaan Agar Thayer Martin



The Thayer Martin agar Ia adalah medium pepejal yang sangat berkhasiat dan terpilih untuk pengasingan Neisseria meningitidis dan Neisseria gonorrhoeae; kedua-duanya dikenali sebagai Neisseria patogenik atau klinikal penting.

Salah satu ciri khas yang paling penting dalam Thayer Martin agar adalah kandungan nutrisi yang tinggi. Harta ini sangat diperlukan, kerana Neisserias sangat memerlukan mikroorganisma dari sudut pemakanan dan oleh itu tidak tumbuh di media biasa.

Lebih-lebih lagi, kerana mikroorganisma ini biasanya terdapat di kawasan dalam nonsterile menambah inhibitor untuk mengelakkan pertumbuhan lain flora ia adalah perlu, tanpa menjejaskan pembangunan genus Neisseria yang.

Ag agar ini terdiri daripada agar agar GC, hemoglobin, tambahan nutrisi tambahan dan bahan-bahan menghambat kompleks (antibiotik dan antijamur). Rumah komersil menjual setiap suplemen secara berasingan.

Sampel yang akan ditanam dalam medium ini bergantung kepada mikroorganisma yang sedang dicari. Untuk Neisseria gonorrhoeae Sampel yang ideal adalah rembesan vagina dan uretra. Sementara untuk Neisseria meningitidis Sampel yang paling banyak digunakan ialah CSF, pharyngeal dan exudates nasofaring.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 asas agar GC
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Suplemen pengayaan
    • 1.4 Perencat
  • 2 Persediaan
    • 2.1 Original Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin diubah suai
  • 3 Gunakan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Had
  • 6 Rujukan

Yayasan

Neisserias adalah mikroorganisma yang dikelaskan sebagai mengganggu dan oleh itu pengasingan mereka adalah sukar. Atas sebab ini, Thayer Martín adalah medium kompleks dan setiap komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah:

GC core agar

GC agar mengandungi proteose peptone, kanji jagung, natrium klorida, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat dan agar-agar. Komponen menyediakan nutrien asas untuk pertumbuhan mikrob, meneutralkan asid lemak toksik membantu mengekalkan keseimbangan osmotik, menentukan pH dan menyediakan konsisten dengan medium pepejal.

Hemoglobin

Hemoglobin menyediakan faktor V dan X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD dan hemin, masing-masing). Oleh itu, dalam persekitaran ini, spesies Haemophilus juga tumbuh. Hemoglobin boleh diperoleh secara komersil dalam bentuk dehidrasi atau darah lembu defibrinasi segar boleh ditambah ke medium.

Suplemen pengayaan

Sebaliknya, suplemen pengayaan mesti ditambah kepada medium Thayer-Martin, kerana nutrien yang terkandung di agar asas tidak mencukupi untuk keperluan genus Neisseria..

Suplemen pengayaan yang paling biasa dipanggil isovitalex. Ini mengandungi glutamin, adenina, NAD, cocarboxylase, guanine, nitrat ferik, p-amino asid benzoik, vitamin B12, thiamine dan glukosa. Semua sebatian ini diperlukan untuk perkembangan neurogenik patogen yang sesuai.

Inhibitor

Kerana ia adalah medium yang sangat berkhasiat, penghambat mesti digunakan untuk mencegah pertumbuhan mikroorganisma flora biasa di kawasan itu dan dengan itu memihak kepada pengasingan genus Neisseria..

Kompleks inhibitor terdiri daripada vancomycin, colistin dan nystatin. Vancomycin menghalang pertumbuhan bakteria Gram-positif, kolistin menghalang perkembangan bakteria Gram-negatif seperti Pseudomonas dan beberapa Neisseria saprophytic, dan nystatin bertindak pada ragi seperti Candida albicans.

Bagaimanapun, kemudian Thayer Martin agar diubahsuai; perubahan itu terdiri daripada penambahan trimethoprim, peningkatan jumlah agar dan penambahan glukosa tambahan. Perubahan ini dengan ketara meningkatkan pemulihan spesies Neisseria gonorrhoeae.

Perlu diingat bahawa trimethoprim menghambat pertumbuhan genus Proteus dan pembentukannya yang berakar umbi. Dalam pengertian ini, antibiotik adalah apa yang memberikan sifat selektif kepada medium Thayer Martin.

Persediaan

Original Thayer Martin Agar

-GC Agar

Berat 8.2 gr medium GC dehidrasi dan larut dalam 100 ml. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan pengadukan kerap untuk dibubarkan secara keseluruhannya. Muntaskan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

-2% hemoglobin

Tahan 2 g hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas untuk membentuk campuran seragam. Tambah sedikit lebih sedikit air untuk menyelesaikan jumlah 100 ml. Penggantungan mestilah homogen sebelum steril.

Sterilisasi dalam autoklaf selama 15 minit.

-Suplemen pengayaan

Jalankan semula jalan komersil dengan bahan pelelas yang disediakan oleh rumah komersial yang sama. Campurkan dengan baik. Jumlah pelarut yang akan digunakan akan dinyatakan dalam instrumen kit..

-Inhibisi suplemen V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)

Rekonstruksi botol dengan pemasok yang disediakan oleh rumah komersial. Campurkan dengan baik. Jumlah pelarut yang akan digunakan akan dinyatakan dalam instrumen kit..

-Disiapkan

Untuk setiap 100 ml GC supaya meneruskan seperti berikut:

Apabila meninggalkan autoclave GC agar, biarkan sejuk pada suhu 50 ° C dan menambah 2 ml larutan hemoglobin yang disediakan, Tambahan 2 ml pengayaan (isobitalex atau britalex), dan 2 ml makanan tambahan perencatan. Campurkan dan berkhidmat dalam hidangan petri steril.

Biarkan mengukuhkan dan simpan dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Warna medium disediakan ialah ceri merah. PH akhir medium ialah 7.2 ± 0.2

Modified Thayer Martin Agar

Berat 8.2 gr medium GC dehidrasi dan larut dalam 100 ml. Tambah 1 g agar dan tambah 0.3 g glukosa. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan pengadukan kerap untuk dibubarkan secara keseluruhannya. Muntaskan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Sediakan suplemen hemoglobin dan pengayaan seperti yang diterangkan di atas.

Suplemen inhibisi yang digunakan adalah V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-Disiapkan

Teruskan seperti yang diterangkan untuk agar Thayer Martin asal.

Guna

Thayer Martin agar harus dipadamkan sebelum menyemai sampel. Sampel yang biasa digunakan ialah exudates pharyngeal, exudates hidung, vagina, urethral dan / atau rektum rektum dan CSF..

Gunakan sampel yang baru diambil dan buat inokula kuat pada agar. Sampel disemai secara langsung oleh pelepasan bahan dan kemudian dibendung oleh kekurangan pada permukaan.

Plat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam balang mikroaerophilic (5% CO2). Pada akhir tempoh inkubasi, plat diperiksa untuk koloni kecil, kelabu, dan kadang-kadang mucoid seperti..

Lakukan ujian biokimia Gram dan mengesahkan koloni yang mencurigakan.

Kawalan kualiti

Untuk melaksanakan kawalan kualiti agar agar Thayer Martin, strain mikrob berikut boleh digunakan.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; dalam kedua-dua strain jangkaan pembangunan yang memuaskan.

Strain berikut juga harus disertakan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Dalam kesemuanya, perencatan jumlah atau sebahagian dijangka dalam medium ini.

Had

-Perlu diingat bahawa bakteria yang tahan terhadap inhibitor yang digunakan dapat tumbuh dalam medium..

-Terdapat pelbagai jenis Neisseria gonorrhoeae yang mungkin sensitif kepada kepekatan vancomycin yang digunakan. Atas sebab ini, disyorkan untuk menggunakan agar coklat ditambah dengan isovitalex selari, tetapi tanpa perencat.

-Terdapat ketahanan yeast tahan nystatin yang boleh tumbuh dalam medium ini dan mengganggu pengasingan patogenik Neisseria, terutama gonococci..

Rujukan

  1. Makmal diagnostik Valtek. Agar Thayer-Martin.2016. Boleh didapati di: com
  2. Makmal Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Boleh didapati di: britanialab.com
  3. Penyumbang Wikipedia. Thayer-Martin agar. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 26 Oktober, 2017, 16:33 UTC. Boleh didapati di: wikipedia.org4. Diakses pada 28 Februari 2019.
  4. Makmal Britania. GC agar. 2010. Boleh didapati di: britanialab.com.
  5. Makmal Makmal Medium Pengayaan BBL ™ untuk Microorganisms Fastidious. 1999. Boleh didapati di: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.