Agar asas, penyediaan dan penggunaan TSI



The TSI agar atau besi triple gula agar adalah medium budaya pepejal yang berfungsi sebagai ujian biokimia untuk membimbing pengenalan awal bakteria Gram negatif. Ia berasaskan kepada penemuan gula yang hadir, dan penghasilan hidrogen sulfida dan gas.

Komposisi dan asasnya sangat mirip dengan ujian besi Kligler, dengan perbezaan yang hanya mengandung glukosa dan laktosa. Sebaliknya, seperti namanya, triple iron iron mengandungi tiga karbohidrat yang dapat ditapai: glukosa, laktosa dan sukrosa..

Di samping itu, medium TSI mempunyai empat derivatif protein yang menjadikannya sangat berkhasiat agar: ekstrak yis, ekstrak daging, peptone dan proteose peptone. Ia juga mengandungi ammonium sulfat feros, natrium thiosulfat, natrium klorida, fenol merah dan agar.

Ketidakupayaan mikroorganisma untuk menapai glukosa yang terdapat dalam medium itu segera mengecualikannya daripada kepunyaan Keluarga Enterobacteriaceae. Oleh itu, ujian ini adalah penting untuk menentukan laluan pengenalan yang perlu diambil untuk menentukan genus dan spesies.

Setiap makmal memutuskan sama ada ia berfungsi dengan TSI agar atau Kligler agar agar.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Natrium klorida dan agar
    • 1.2 penunjuk pH (merah fenol)
    • 1.3 Derivat protein (ekstrak yis, ekstrak daging, peptone dan proteose peptone)
    • 1.4 Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)
    • 1.5 Pengeluaran gas
    • 1.6 Sodium thiosulfate dan ammonium sulphate ferrous (pengeluaran hidrogen sulfida)
  • 2 Persediaan
  • 3 Kegunaan
  • 4 dibiakkan
  • 5 Had
  • 6 Rujukan

Yayasan

Setiap satu daripada sebatian memenuhi fungsi dalam medium.

Natrium klorida dan agar

Natrium klorida diperlukan untuk mengekalkan keseimbangan osmosis medium. Sedangkan agar memberikan konsistensi padat.

Penunjuk PH (fenol merah)

PH medium disediakan seimbang kepada 7.3 dan penunjuk pH (fenol merah) bertukar menjadi kuning di bawah 6.8. Ini bermakna bahawa sejumlah kecil asid yang dihasilkan oleh penapaian gula akan menjadikan medium dari merah-oren menjadi kuning.

Sekiranya penapaian tidak berlaku maka alkalinisasi akan menjadi medium dengan menggunakan peptones, beralih dari merah-oren ke merah yang kuat.

Derivat protein (ekstrak yis, ekstrak daging, peptone dan proteose peptone)

Apabila bakteria memetabolisme protein yang terdapat dalam agar TSI, amina dihasilkan yang mengalirkan medium (terutamanya pada tahap serong), kerana reaksi memerlukan oksigen. Amina menghidupkan bezel menjadi merah kuat.

Tetapi ini bergantung kepada keupayaan bakteria untuk menanam karbohidrat atau tidak.

Penapaian karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Kajian mengenai penapaian gula boleh memberi beberapa imej dan masing-masing diterjemahkan secara berbeza. Tafsiran ujian membahagikan mikroorganisma kepada 3 kategori: fermentasi bukan glukosa, fermentasi bukan laktosa dan fermentasi laktosa / sukrosa.

Perlu diperhatikan bahawa jumlah glukosa dalam medium adalah terhad, sedangkan kepekatan laktosa dan sukrosa adalah 10 kali lebih tinggi.

Bakteria keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisma penapaian glukosa lain akan mula menapai gula ini kerana ia adalah karbohidrat paling mudah untuk tenaga..

Sebaliknya, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang mesti dipecahkan dan diubah menjadi glukosa supaya mereka dapat memasuki kitaran Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisma glukosa tanpa fermentasi

Apabila mikroorganisma yang disuntikkan tidak mampu menapai glukosa, lebih kurang dapat menanam karbohidrat lain. Oleh itu, asid tidak terbentuk di sini, tetapi terdapat pembentukan amina dalam serong akibat penggunaan peptone.

Dalam kes ini serong berubah menjadi merah yang lebih kuat dan bahagian bawah tiub boleh kekal tidak berubah atau boleh juga di alkali, meninggalkan keseluruhan tiub merah.

Tafsiran: K / K bermaksud latar belakang alkali / alkali atau neutral alkali

Dalam imej yang pada awal artikel lihat imej tiub D.

Hasil ini menunjukkan bahawa mikroorganisma tidak tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisma tanpa penapaian laktosa / sukrosa

Jika bakteria mampu menapai glukosa tetapi bukan laktosa atau sukrosa, perkara berikut akan berlaku:

Bakteria akan mengkonsumsi semua glukosa selepas kira-kira 6 hingga 8 jam, dapat mengasalkan kedua-dua serong dan taco; iaitu, agar akan sepenuhnya menjadi kuning. Tetapi apabila glukosa berkurangan dan ketidakupayaan untuk menggunakan laktosa dan sukrosa, bakteria akan memulakan metabolisme protein.

Reaksi ini memerlukan oksigen, oleh itu, kemerosotan peptone berlaku pada permukaan (serong). Amina yang dihasilkan mengalkali bezel dengan menjadikan kuning menjadi merah. Tindak balas ini dibuktikan pada 18 hingga 24 jam inkubasi.

Tafsiran: K / A bermaksud taco alkali dan asid taco.

Dalam imej yang pada awal artikel lihat imej tiub B.

-Mikroorganisma penapaian laktosa / sukrosa

Jelasnya, mikroorganisma yang mampu menapai laktosa dan sukrosa dapat menapai glukosa. Selepas jumlah minimum glukosa yang terdapat dalam medium habis, piruvat terbentuk bermula untuk memetabolisme untuk membentuk asid melalui kitaran aerobik Krebs, dan dalam tempoh 8 hingga 12 jam semua medium akan menjadi kuning.

Jika bakteria mampu membelah laktosa atau sukrosa, asid akan terus dihasilkan, dan selepas 18 hingga 24 jam seluruh tiub - paruh dan taco - akan kekal kuning.

Perlu diperhatikan bahawa penggunaan glukosa dilakukan dalam dua cara: satu dalam bentuk aerobik dalam serong tiub, dan yang lain secara anaerobik di bawah tiub.

Tafsiran: A / A bermakna bevel asid / asid bawah. Ia boleh menyampaikan gas atau tidak.

Dalam imej yang pada awal artikel melihat imej tiub A.

Pengeluaran gas

Sesetengah mikroorganisma mampu menghasilkan gas semasa penapaian gula. Gas dibuktikan di dalam tiub dengan tekanan yang dikenakan di dalam agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau anjakan agar. Kadang-kadang pembentukan gas boleh patah medium.

Adalah penting bahawa pada masa penanaman medium TSI, tusuk dibuat dengan bersih oleh pusat agar sampai mencapai bahagian bawah. Jika tusuk dialihkan ke arah dinding tiub, ia boleh menyebabkan positif palsu dalam pengeluaran gas, kerana ia akan melarikan diri melalui saluran yang dibentuk secara salah.

pengeluaran gas dan tindak balas yang berlaku dalam agar bezel, memerlukan oksigen, oleh itu ia adalah disyorkan bahawa tiub dipasang dengan palam kapas, dan jika Bakelite cap digunakan, ini tidak harus ditetapkan sepenuhnya.

Pengeluaran gas dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Sodium thiosulfate dan ammonium sulfat ferus (pengeluaran hidrogen sulfida)

Bakteria yang mampu mengeluarkan hidrogen sulfida (gas tanpa warna), mengambil sulfur natrium thiosulfat yang terdapat dalam medium. Setelah H terbentuk2S bertindak balas dengan ferum ammonium sulfat, menghasilkan besi sulfida (precipitate hitam jelas kelihatan).

Pengeluaran H2S dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Dalam imej yang pada awal artikel lihat imej tiub C.

Persediaan

Timbang 62.5 gr gula gula triple dehidrasi (TSI) agar dan larut dalam satu liter air sulingan.

Panaskan sehingga agar dibubarkan sepenuhnya. Rebus selama beberapa minit dengan kacau. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berehat dengan cara yang cenderung. Penjagaan mesti diambil bahawa kedua-dua pangkalan dan bezel mempunyai jarak yang sama.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C Biarkan tenggelam sebelum menanam ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah cahaya kuning air dan medium yang disediakan adalah oren merah

PH akhir medium yang disediakan ialah 7.3 ± 0.2.

Kegunaan

Ujian TSI digunakan secara meluas di peringkat makmal mikrobiologi. Ujian ini adalah penting untuk membimbing jenis ujian yang mesti digunakan untuk mengenal pasti genus dan spesies. Pelaksanaan dan tafsirannya yang baik dapat menyelamatkan bahan dan kerja.

Jika hasilnya adalah TSI K / K dan ujian cytochrome oxidase adalah positif, ia dikenali bahawa ujian untuk mengenal pasti bukan Fermenter seperti Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia Gram riba negatif, antara genre lain harus digunakan. Jika ia adalah oksidase negatif ia berorientasikan ke arah genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, dan sebagainya..

Tetapi jika anda mendapat TSI A / A atau K / A dan ujian cytochrome oxidase adalah negatif, mengurangkan lagi nitrat kepada nitrit, mempunyai kepastian bahawa ia adalah mikroorganisma yang dipunyai oleh keluarga Enterobacteriaceae itu. Dalam hal ini laluan pengenalan akan berorientasikan kepada ujian khusus untuk kumpulan bakteria ini.

Lebih-lebih lagi, jika K / A atau A / A imej dan ujian cytochrome oxidase adalah positif diperolehi, ujian tambahan untuk menunggang akan bertujuan untuk mengenal pasti penapaian strain bukan kepunyaan keluarga Enterobacteriaceae, seperti Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan membimbing pengenalan genera berikut keluarga Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

TSI dengan hidrogen sulfida yang terhad atau sederhana dalam bevel alkali dengan bahagian bawah alkali dan oksidasi positif akan membimbing penggunaan ujian untuk mengenal pasti bakteria Gram-negatif, tanpa penapaian H menghasilkan2S, seperti Shewanella putrefaciens.

Akhirnya, TSI boleh digunakan untuk penyiasatan penghasilan hidrogen sulfida dalam bacaan Gram-positif, terutama apabila dicurigai Erysipelothrix rhusiopathiae.

Sown

Media TSI mestilah disuntik dengan koloni tulen, diasingkan dalam budaya utama atau selektif. Sekiranya tanah jajahan diambil dari media selektif yang telah dipilih dengan sampel dengan campuran flora, perhatian harus diambil untuk mengambil hanya permukaan, kerana di bahagian bawah koloni mungkin ada strain yang dapat dihalang dalam medium.

Oleh itu, gelung tidak boleh disejukkan dalam medium selektif dan kemudian mengambil tanah jajahan dan menumpukan medium TSI.

Penanaman akan dilakukan dengan gelung lurus atau jarum. Tusukan akan dibuat, dengan menjaga bahawa ia adalah melalui pusat tengah hingga mencapai bahagian bawah, dan kemudian penanaman selesai menumpuk permukaan dengan cara zigzag. Jangan buat dua punca.

Inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Mentafsirkan pada masa ini, tidak sebelum atau selepas.

Had

Ujian TSI perlu dibaca di antara 18 hingga 24 jam inkubasi. Bacaan sebelum masa ini boleh memberi positif palsu penapaian A / A. Sedangkan pembacaan selepas waktu ini, dapat menimbulkan imej negatif palsu bukan fermentor, karena penggunaan peptones yang alkali menengah.

Rujukan

  1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Ed ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Ed ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Boleh didapati di: en.wikipedia.org
  5. Makmal Britania. TSI Agar (Triple iron agar agar). 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  6. BD Laboratories Triple sugar agar agar (TSI Agar). 2003. Boleh didapati di: bd.com