Vogel-Johnson Agar asas, penyediaan dan kegunaan



The Vogel-Johnson agar adalah medium budaya pepejal, terpilih dan perbezaan, yang dirumus khas untuk pengasingan Staphylococcus aureus. Media ini dicipta oleh Vogel dan Johnson pada tahun 1960 dari pengubahsuaian guramin agarur yang dirumuskan pada tahun 1955 oleh Zebovitz, Evans dan Niven.

Pengubahsuaian ini terdiri daripada peningkatan kepekatan mannitol yang ada dalam medium dan dalam penambahan penunjuk pH. Formula semasa terdiri daripada triptein, ekstrak yis, manitol, fosfat dipotassium, litium klorida, glisin, fenol merah, agar, larutan 1 kali kalium titis dan air.

Harus diingat bahawa ada cara lain yang, seperti Vogel-Johnson agar, selektif untuk pengasingan S. aureus, seperti mannitol agar asin dan agar Baird Parker agar. Dalam pengertian ini, dapat dikatakan bahawa asas agar agar Vogel-Johnson adalah campuran antara agar mannitol masin dan agar Baird Parker agar..

Pada mulanya tanah jajahan S. aureus Mereka dibezakan dengan menanam manitol dan menjadikan penunjuk pH menjadi kuning. Sebaliknya, pada saat kedua S. aureus ia dicirikan dengan mengurangkan tellurit kepada tellurium dan membentuk kelabu kepada koloni hitam. Kedua-dua sifat ini diperhatikan dalam Vogel-Johnson agar.

Media ini, seperti rakan-rakannya, berguna untuk pengesanan Staphylococcus aureus dalam sampel makanan, kawalan kebersihan produk perindustrian dan dalam sampel klinikal.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Sumbangan nutrien
    • 1.2 kuasa terpilih
    • 1.3 Kuasa bawaan
    • 1.4 Imbangan Osmotic dan agen pemantapan
  • 2 Persediaan
    • 2.1 1% w / v larutan tellurite
    • 2.2 Vogel-Johnson supaya medium asas
  • 3 Gunakan
  • 4 Kawalan kualiti
  • 5 Rujukan

Yayasan

Sumbangan nutrien

Medium Vogel-Johnson mengandungi triptein dan ekstrak ragi; kedua-dua bahan ini menyediakan asid amino rantaian panjang yang berfungsi sebagai sumber karbon dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Bakteria yang mampu berkembang dalam medium ini akan mengambil nutrien dari bahan ini.

Kuasa terpilih

Vogel-Johnson agar mampu menghalang pertumbuhan bakteria Gram-negatif dan juga beberapa bakteria Gram-positif, memihak kepada perkembangan staphylococci positif-koagulase. Bahan yang menghambat ialah tellurite kalium, litium klorida dan glisin.

Kuasa yang berbeza

Bahan-bahan yang menjadikan medium pembezaan ini adalah manitol dan potassium tellurite. Mannitol adalah karbohidrat, dan apabila ia ditapai, asid dihasilkan yang menjadikan media dari merah ke kuning, yang berlaku berkat kehadiran penunjuk pH merah fenol.

Sementara itu, tellurite tanpa warna apabila dikurangkan menjadi telluride percuma metalik, mengambil kelabu gelap kepada warna hitam.

The Staphylococcus aureus fermentasi mannitol dan mengurangkan tellurit kepada tellurium. Itulah sebabnya koloni tipikal S. aureus dalam medium ini mereka kelabu atau hitam dikelilingi oleh medium kuning.

Bakteria yang tumbuh di dalam medium ini dan tidak mengurangkan manurit atau fermentasi mannitol, akan membentuk koloni telus yang dikelilingi oleh medium merah, lebih sengit daripada warna asal, kerana alkalinisasi medium dengan penggunaan peptone..

Sebaliknya bakteria yang mengurangkan tellurite tetapi tidak menanam manitol akan tumbuh sebagai koloni berwarna kelabu atau hitam yang dikelilingi oleh warna merah.

Sekiranya medium disediakan tanpa penambahan potassium tellurite, koloni S. aureus mereka akan berkembang sebagai koloni kuning, dikelilingi oleh medium kuning, seperti dalam mannitol agar agar.

Imbangan Osmotic dan agen pemantapan

Fosfat dipotassium mengekalkan keseimbangan osmosis medium dan menyesuaikan pH kepada neutraliti 7.2. Sedangkan agar menghasilkan konsistensi padat untuk medium budaya.

Persediaan

1% penyelesaian larutan kalium w / v

Penyelesaian ini tidak termasuk dalam medium yang kering, kerana ia tidak boleh disterilkan dalam autoklaf. Atas sebab ini, ia disediakan secara berasingan dan ditambahkan ke medium yang disterilkan.

Sesetengah rumah komersil menjual penyelesaian penggunaan kalium 1 kali kali siap sedia. Jika anda ingin menyediakan di makmal, teruskan seperti berikut:

Timbang 1.0 g potassium tellurite dan ukur 100 ml air sulingan. Larutkan tellurite kalium dalam bahagian air dan kemudian selesaikan jumlah air sehingga mencapai 100 ml. Isikan larutan dengan cara penapisan.

Medium asas Vogel-Johnson agar

Timbang 60 g medium dehidrasi, dan larut dalam 1 liter air sulingan. Campuran dipanaskan hingga mendidih untuk membantu pembubaran lengkap. Semasa proses pembubaran, media sering diganggu.

Mensterilkan dalam autoklaf pada tekanan 15 kg dan 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri sehingga medium mencapai suhu kira-kira 45 hingga 50 ° C. Tambah 20 ml larutan kalium sedia ada kalium kepada 1%.

Campurkan dan tuangkan ke dalam hidangan petri steril. Biarkan mengukuhkan dan memerintahkan terbalik dalam plak untuk menyimpan kemudian di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

PH akhir medium yang disediakan hendaklah berada pada 7.2 ± 0.2.

Sebelum menanam sampel, tunggu sehingga plat mengambil suhu ambien.

Warna medium disediakan adalah merah.

Guna

Walaupun ia boleh digunakan untuk pengasingan S. aureus dalam mana-mana jenis sampel, ia kebanyakannya digunakan untuk analisis mikrobiologi produk farmaseutikal, kosmetik dan makanan.

Adalah disyorkan bahawa inokulum adalah padat. Pembenihan boleh dilakukan dengan mengejar dengan pegangan platinum atau dengan permukaan dengan spatula Drigalski.

Plat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.

Kawalan kualiti

Untuk menjalankan kawalan kualiti media Vogel-Johnson, strain kawalan berikut boleh digunakan:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Hasil yang diharapkan adalah seperti berikut: untuk strain-strain S. aureus Pertumbuhan yang memuaskan dengan koloni hitam dikelilingi oleh medium kuning. Untuk S. epidermidis pertumbuhan biasa dengan koloni tembus atau hitam yang dikelilingi oleh medium merah.

Begitu juga, untuk E. coli ia dijangka akan berlaku jumlah perencatan, dan untuk Proteus mirabilis perencatan sebahagian atau keseluruhan; jika ia tumbuh ia akan melakukannya dengan jimat dan koloni akan hitam dikelilingi oleh warna merah sederhana.

Rujukan

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel dan Johnson Agar). 2006. Boleh didapati di: bd.com
  2. Makmal Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. Boleh didapati di: britanialab.com
  3. Makmal Britania. Tellurium potassium. 2015. Boleh didapati di: britania.com
  4. Makmal Himedia. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Boleh didapati di: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel- Johnson Agar Base. Manual Mikrobiologi Merck. Edisi ke-12, ms 502-503. Terdapat dalam: Pengguna / Pasukan / Muat Turun
  6. Penyumbang Wikipedia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedia untuk livre ensiklopedia,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Covenin Standard Venezuela 1292-89. (1989). Makanan Pengasingan dan pengiraan Staphylococcus aureus. Terdapat dalam:sencamer.gob.ve