Asas dan teknik pandang Kinyoun



The Mengotorkan Kinyoun Ini adalah teknik pewarna yang digunakan untuk mencemarkan bakteria asid dan cepat parasit asid. Ia dilahirkan dari pengubahsuaian Ziehl-Neelsen; Kedua teknik ini ditafsirkan dengan cara yang sama tetapi mereka berbeza dalam dua unsur: dalam penyediaan reagen utama dan dalam teknik Kinyoun tidak menggunakan haba.

Atas sebab ini ia juga dikenali sebagai sejuk yang diubah suai Ziehl-Neelsen atau Kinyoun pewarnaan sejuk. Ia ditunjukkan untuk pewarna Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, mycobacteria atipikal, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris dan Cyclosporas cayetanensis.

Perlu dinyatakan bahawa Nocardias mengotorkan lemah dengan teknik ini kerana mereka adalah sebahagian daripada alkohol yang tahan asid, jadi untuk genre ini terdapat pengubahsuaian metodologi.

Sebaliknya, teknik sejuk Kinyoun digabungkan dengan teknik trikrom yang diubahsuai oleh Didier untuk pengesanan coccidia (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) dan spesis microsporidia (Enterocytozoon bieneusi dan Encephalitozoon intestinalis).

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Teknik
    • 2.1 Bahan
    • 2.2 Penyediaan fuchsin Kinyoun fenikated
    • 2.3 Penyediaan asid alkohol
    • 2.4 Penyediaan methylene blue contrast pewarna
    • 2.5 Kaminun teknik noda
    • 2.6 Teknik Kinyoun khas untuk Nocardias
    • 2.7 Teknik gabungan fenolik fenolik dan trichromik diubahsuai oleh Didier
    • 2.8 Kawalan kualiti
  • 3 Teknik Kinyoun berbanding dengan teknik Ziehl -Nelselsen
  • 4 Rujukan

Yayasan

Reagen utama adalah pewarnaan carbolfuchsin atau Fuchsin, yang mempunyai harta mengikat kepada asid karbol yang sedia ada dalam dinding sel berlilin lipid kaya (asid mycolic) daripada Mycobacteria dan parasit tertentu.

Kesatuan itu tidak dilancarkan oleh asid warna; oleh itu, mikroorganisma ditakrifkan sebagai alkohol tahan asid.

Tidak seperti teknik Ziehl-Neelsen yang membetulkan pewarna melalui heat-, dalam teknik Kinyoun langkah ini tidak perlu, kerana penyelesaian Fuchsin bersedia untuk teknik ini mengandungi kepekatan tinggi fenol.

Phenol membubarkan bahan lipid dinding sel, yang membolehkan kemasukan pewarna carbol fuchsin. Setelah pewarna menembusi, ia tetap tetap walaupun dibasuh dengan asid alkohol.

Dengan cara ini, mikroorganisma tahan asid mengambil warna merah ciri-ciri, sementara semua yang tidak alkohol tahan asid menjadi berubah warna dan berwarna biru..

Teknik

Bahan

- Fuchsin fenolik diubahsuai.

- Asid alkohol.

- Biru metilena.

Penyediaan fuchsin Kinyoun fenikated

- Fuchsin asas: 4 gr.

- Phenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Air suling: 100 ml.

Fuchsin asas dalam alkohol mestilah dibubarkan perlahan-lahan, mencampurkan secara berterusan. Selepas itu, fenol yang terhablur dicairkan dalam tab mandi air pada 56 ° C. Setelah dibubarkan, tambahkan 8 ml ke larutan fuchsin yang disediakan di atas.

Penyediaan asid alkohol

- Asid hidroklorik yang dipekatkan: 3 ml.

- Ethanol (95%): 97 ml.

Ia mesti diukur, bergabung dan dicampur.

Penyediaan methylene blue contrast pewarna

- Methylene blue: 0.3 g.

- Air suling: 100 ml.

Ia ditimbang dan dibubarkan.

Teknik kainun Kinyoun

1- Sediakan sebatian langsung dari sampel, yang boleh menjadi dahak, cecair paru, sedimen urin, cecair cerebrospinal atau tinja, antara lain; atau dari penggantungan mikroorganisma yang diperolehi daripada koloni tulen yang dibangunkan dalam media budaya utama.

2 - Betulkan smear dengan panas.

3- Letakkan smear pada jambatan pewarna dan tutup dengan reagen fenik fenolik Kinyoun yang disediakan. Biarkan ia duduk selama 3 atau 5 minit.

- Basuh dengan air sulingan.

5- Bleach dengan alkohol asid selama 3 minit dan basuh lagi dengan air sulingan.

6- Bleach sekali lagi dengan alkohol asid selama 1 atau 2 minit sehingga tiada lagi pewarna diseret.

- Basuh dengan air suling dan biarkan longkang, letakkan slaid dalam kedudukan tegak.

8. Tutup penyediaan dengan metilena biru dan biarkan selama 4 minit.

9 - Basuh dengan air suling dan biarkan udara kering.

10 - Periksa pada 40X dan kemudian pada 100X.

Jika anda mahu asid mengotorkan alkohol mikroorganisma tahan baik dan disegerakan, satu penurunan agen pembasahan ditambah (seperti Tergitol No. 7) 30 atau 40 ml Fuchsin Kinyoun.

Sesetengah makmal menukar warna metilena pewarna biru untuk asid hijau atau asid picik; yang pertama memberikan warna hijau ke latar belakang dan yang kedua menghasilkan warna kuning.

Teknik Kinyoun khas untuk Nocardias

Untuk meningkatkan pengotor bakteria Nocardia, pengubahsuaian pengubahan Kinyoun digunakan. Teknik ini adalah seperti berikut:

1- Meliputi smear dengan Kinyoun fenicated fuchsin selama 3 minit.

2 - Basuh dengan air sulingan.

3- Peluntur secara ringkas dengan 3% asid alkohol yang disediakan sehingga tidak ada lagi pewarna.

- Basuh lagi dengan air suling.

5- Tutup penyediaan dengan metilena biru dan biarkan selama 30 saat.

- Basuh dengan air suling dan biarkan udara kering.

Teknik gabungan phenolic dan trichromic fuchsin diubahsuai oleh Didier

Teknik ini disyorkan untuk analisis sampel najis untuk mencari coccidia dan spora Microsporidium sp pada masa yang sama Prosedur yang harus diikuti adalah seperti berikut:

1- Meliputi smear dengan Kinyoun phenolic fuchsin selama 10 minit.

2 - Keluarkan pewarna dan basuh dengan air sulingan.

3- Bleach selama 30 saat dengan asid hidroklorik alkohol.

- Basuh lagi dengan air suling.

5- Tutup cairan dengan larutan trikrom selama 30 minit pada 37 ° C.

- Basuh dengan air sulingan.

7- Decolorize selama 10 saat dengan asid asetik alkohol.

8. Basuh cecair selama 30 saat menggunakan 95% etanol.

Kawalan kualiti

Sebagai kawalan positif, smear disediakan dengan strain Mycobacterium tuberculosis dan bernoda dengan reagen yang disediakan untuk mengesahkan bahawa bakteria mengambil warna yang betul (merah-fuchsia).

Kawalan negatif juga boleh digunakan dengan menyediakan smear dengan apa-apa terikan yang tidak alkohol tahan asid, dengan itu mengesahkan bahawa keseluruhan sampel mengambil warna kontras.

Teknik Kinyoun berbanding teknik Ziehl -Nelselsen

teknik Kinyoun adalah lebih mudah kerana ia menghapuskan langkah pemanasan, tetapi kelebihan utama adalah bahawa ia mengelakkan pelepasan wap, sangat toksik dan menyebabkan kanser jangka panjang. Oleh itu Kinyoun pewarnaan adalah lebih selamat untuk kakitangan yang bertanggungjawab bagi menjalankan dyeings.

Adalah penting untuk mengambil kira bahawa adalah perlu untuk menjaga agar reagen tidak bersentuhan langsung dengan kulit, kerana ia menghakis dan peluntur mudah terbakar.

Mengenai kelemahan, satu smear negatif tidak semestinya menunjukkan bahawa mikroorganisma tidak hadir. Di samping itu, kehadiran detritus sel boleh menyebabkan positif palsu, yang menghasilkan kekeliruan dalam diagnosis.

Rujukan

  1. Kimia Klinikal Gunaan (2016). BK Kinyoun Kit boleh didapati di: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun noda dan dua Coccidia dalam HIV. Jurnal Perubatan MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Penyumbang Wikipedia. "Kinyoun noda." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. Wikipedia, Ensiklopedia Bebas, 8 Feb. 2018. Web. 5 Jan. 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, memangku Zanetta E. Pelaksanaan teknik pewarnaan untuk diagnosis serentak coccidia dan Microsporidia. Kebersihan Institut Universiti Republik. Montevideo. Uruguay Boleh didapati di: higiene.edu.uy