Stain oleh asas, teknik dan kegunaan May Grünwald-Giemsa



The May Grünwald-Giemsa noda o Pappenheim adalah teknik pewarnaan berbeza yang menggabungkan reagen Giemsa dan May Grünwald. Ia digunakan untuk pembezaan sel-sel darah normal dan tidak normal di dalam perut darah dan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan bahagian-bahagian histologi dan sampel sitologi.

Kedua-dua reagen - Gemsa dan May Grünwald - berasal daripada pewarnaan jenis Romanowsky, teknik yang berasaskan kombinasi asid dan pewarna asas.

Giemsa memperbaiki teknik ini dengan menstabilkan campuran eosin, metilena biru dan derivatifnya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan metilena biru, menggunakan metanol sebagai pelarut. Gabungan strategik ini memberikan hasil yang sangat baik.

Manakala dari segi pemerhatian sel morfologi bertindak sama seperti Giemsa dan Wright, teknik ini meningkatkan penalaan atas parasit pewarna yang menyebabkan malaria, Chagas, leishmaniasis dan trichomoniasis.

Selain itu, ia telah terbukti menjadi teknik yang sangat berguna untuk kajian sitologi cairan sperma. Ia telah diketengahkan bukan sahaja dengan menunjukkan ciri-ciri morfologi sperma, tetapi juga sangat berkesan membezakan leukosit, sel-sel epitelium dan spermatogenesis.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Pelbagai pewarna
  • 2 Teknik
    • 2.1 Bahan
    • 2.2 Penyelesaian pewarna Concentrated May Grünwald
    • 2.3 Pewarna Giemsa yang dipekatkan
    • 2.4 Penyediaan penyelesaian penampan di pH 7.2
    • 2.5 Prosedur pewarnaan darah atau prosedur penyingkiran sum-sum tulang
    • 2.6 Teknik pewarnaan cecair sperma
    • 2.7 Spesifikasi penting
  • 3 Kegunaan
    • 3.1 sitologi vagina
    • 3.2 Sampel sperma
  • 4 Rujukan

Yayasan

Teknik ini mengikuti asas noda Romanowsky, di mana pewarna asid mempunyai afiniti selektif untuk komponen asas selular dan komponen berasid menarik pewarna asas.

Dijelaskan dengan cara lain, kedua-dua struktur dan pewarna sel mempunyai caj elektrik positif atau negatif; caj yang sama dikenakan dan caj yang berbeza tertarik.

Sebagai contoh, pewarna asas seperti biru metilena dicas positif dan tertarik dengan struktur yang dikenakan negatif. Sebab itulah noda pewarna noda ini kaya dengan DNA dan RNA yang mempunyai kumpulan fosfat yang negatif.

Biji-bijian basofil dan sitoplasma yang tersegra di sel darah putih mononuklear yang mengandungi RNA juga berwarna.

Begitu juga, pewarna asid membawa muatan negatif, oleh sebab itu ia bergabung dengan struktur yang dikenakan positif seperti eritrosit dan butiran-butiran eosinofil yang tersegmentasi. Bagi butiran-butiran neutrofil tersegmen, ini memperbaiki kedua-dua pewarna.

Pelbagai pewarna

Dalam teknik ini, gabungan tindak balas antara pewarna orthochromatic dan metachromatics wujud bersama. Orthochromatics (eosin dan biru metilena) mengikat struktur sel yang mana ia berkaitan dan memberikan warna yang stabil yang tidak berbeza.

Sebaliknya, metachromatics (derivatif biru meteor biru azure A dan azure B), mengubah warna asalnya apabila ia terikat kepada struktur tertentu, dan mungkin terdapat pelbagai warna.

Akhirnya, langkah yang dibawa oleh penyelesaian May Grünwald memerlukan kehadiran air, kerana tanpa ia pewarna akan menembusi struktur tetapi tidak akan diperbaiki. Untuk ini berlaku pewarna mesti menjadi polar atau terion, dan dengan demikian dapat mendakan dan melekat pada struktur yang berkaitan.

Teknik

Bahan

- Slaid untuk slaid.

- Jambatan mewarna.

- Penyelesaian May-Grünwald.

- Giemsa noda.

- Air sulingan.

Penyelesaian pewarna berpusat Mei Grünwald

Kita mesti menimbang 0.25 g biru eosin-metilena (pewarna mengikut May Grünwald) dan larut dalam 100 ml metanol. Campuran kemudian dicampurkan selama 1 jam dan dibiarkan berehat selama 24 jam. Selesai masa, ia menapis.

Untuk memohon teknik untuk menjadi pewarna dicairkan Mei Grünwald berikut: untuk 200 ml pewarna cair 30 ml larutan pekat diukur, 20 ml larutan penimbal ditambah dan 150 ml air suling diselaraskan untuk pH7.2-7.3 . Ia kemudian bercampur dan ditapis.

Pewarna Giemsa terkonsentrasi

Timbang 0.5 g azur-eosin-metilena biru (pewarna mengikut Giemsa), larutkan dalam 50 ml metanol dan letakkan 50 ml gliserin dalam campuran.

Untuk melaksanakan teknik tersebut, cair 1:10 dengan larutan penampan dan biarkan ia berehat selama 10 minit. Ia boleh ditapis jika perlu.

Penyediaan penyelesaian penampan di pH 7.2

Mereka mesti ditimbang:

- 40 mg kalium di-hidrogen fosfat (KH2PO4).

- 151 mg natrium hidrogen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua-dua sebatian dibubarkan dalam 100 ml air.

Prosedur pewarnaan darah atau prosedur penyingkiran sum-sum tulang

Terdapat dua modaliti: klasik dan pantas.

Mod klasik

  1. Sampulkan smear selama 2 atau 3 minit dengan penyelesaian May-Grünwald yang dilarutkan.
  2. Basuh dengan air suling buffer untuk menghapuskan penyelesaian sebelumnya.
  3. Tutup dengan larutan cuci buffer yang sama dan biarkan selama 1 minit. Idea ini adalah bahawa pewarna sebelumnya tetap pada struktur dan itu, pada masa yang sama, sel-selnya terhidrasi.
  4. Tambah 12 titis Giemsa berwarna cair pada air buffered dan pukulan untuk campuran dan homogenisasi. Biarkan selama 15 atau 20 minit.
  5. Basuh bocoran dengan air suling buffer dan letakkan di udara kering.
  6. Fokus dan perhatikan dalam mikroskop optik sel-sel darah yang berwarna dengan menggunakan objektif 40X. Sekiranya perlu, 100X boleh digunakan.

Mod Pantas

  1. Tutup cecair dengan pewarna Mei Grünwald dicairkan selama 1 minit.
  2. Basuh dengan air suling buffer.
  3. Tutup dengan air buffer dan biarkan selama 1 minit.
  4. Letakkan pewarna Giemsa yang dicairkan dan biarkan selama 5 minit.
  5. Basuh dengan air suling buffer dan biarkan udara kering.

Teknik-teknik yang diterangkan di sini adalah panduan panduan, tetapi perlu diambil kira bahawa prosedur dan masa pewarnaan berbeza-beza mengikut rumah komersial yang membekalkan reagen. Adalah dinasihatkan untuk mengikuti langkah-langkah yang ditunjukkan oleh setiap rumah komersial.

Teknik pewarnaan cecair sperma diperluaskan

1 Cover spread dengan lapisan Mei May Grünwald nipis selama 4 minit.

2 - Keluarkan pewarna dan basuh dengan air sulingan.

3- Letakkan lapisan Giemsa yang dicairkan (1:10) dalam air suling selama 15 minit.

4- Keluarkan pewarna dan basuh dengan air sulingan.

5- Biarkan kering dan perhatikan di bawah mikroskop.

Spesifikasi penting

Teknik ini memerlukan reagen dan penyelesaian basuh mempunyai pH diselaraskan kepada 7.2 -7.3 supaya pertalian pewarna struktur sel tidak diputarbelitkan dan tidak berbeza-beza warna akhir dijangka.

Kegunaan

Teknik ini digunakan oleh makmal klinikal untuk mencemarkan smears darah periferal dan sumsum tulang, bahagian tisu dan sitologi.

Di bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam kajian keabnormalan sel-sel dari segi bentuk, saiz dan nombor. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.

Di samping itu, ia membekalkan utiliti yang cemerlang apabila mencari parasit dalam bidang hematologi (Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi) atau histologi (Leishmanias sp).

Sitologi vagina

Bagi sitologi faraj, teknik ini amat berfaedah untuk pemerhatian Trichomonas vaginalis. Ini adalah satu penemuan yang penting, kerana kehadirannya menyerupai gambar karsinoma in situ yang kemudian hilang apabila parasit dihapuskan.

Sampel sperma

Ia telah menjadi alat yang ideal untuk mengkaji sampel sperma, kerana ia memberikan maklumat berharga mengenai kualiti sperma.

Data yang disediakan terutamanya bilangan dan morfologi, dan juga sel-sel seiring yang boleh hadir dan yang penting, kerana sel-sel kuman, leukosit dan sel-sel epitelium.

Dengan analisis ini adalah mungkin untuk menggambarkan keabnormalan yang diamati dalam sperma di kepala, leher, bahagian tengah dan sekeping utama.

Di samping itu, mereka juga boleh membantu kes Persembahan haemospermia (kehadiran sel-sel merah dalam air mani) dan leucospermia atau piospermia (peningkatan bilangan leukosit dalam air mani).

Rujukan

  1. Costamagna S, Prado M. Pengesahan ujian baru, May Grünwald-Giemsa dan warna Gramwal dan media kultur untuk diagnosis Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Terdapat dalam: scielo.
  2. Makmal Merck KGaA. Mei Grünwald eosin metilena biru untuk mikroskopi.
  3. "May-Grünwald-Giemsa noda." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratori Kaca Bahan Kimia Panreac. Reagen untuk teknik histologi, hematologi dan mikrobiologi. Boleh didapati di: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Saranan untuk pewarnaan smear darah untuk membaca kiraan darah. Makmal Biomedikal Kebangsaan dan Rujukan. Institut Kesihatan Awam Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram mengikut kriteria WHO. Program Anatomi dan Biologi pembangunan. Fakulti Perubatan Universiti Chile Boleh didapati di: pp.centramerica.com