Asas, bahan, teknik dan kegunaan Wright's noda



The Noda kejahatan adalah teknik pewarnaan yang dicipta oleh ahli patologi Amerika James Homer Wright pada tahun 1902, dari noda Romanowsky. Oleh kerana noda Romanowsky tidak stabil, Wrigth menggabungkan metanol sebagai pelarut dan fiksatif.

Pewarnaan ini adalah polikromatik, yang bermaksud bahawa ia menghasilkan beberapa warna bergantung pada struktur yang menyerap pewarna. Teknik pewarnaan ini telah digunakan secara meluas untuk melakukan pengiraan sel darah putih dan mengkaji morfologi sel darah merah, platelet dan leukosit dalam darah perifer dan sumsum tulang..

Aplikasinya sangat penting, kerana keabnormalan dapat dilihat pada garis sel darah yang berbeza, memudahkan diagnosis penyakit seperti leukemia atau infeksi bakteria atau parasit.

Mungkin ini adalah aplikasi yang paling biasa di mana teknik ini digunakan, namun ia bukan satu-satunya. Ia juga berguna dalam sampel selain daripada darah dan sumsum tulang, seperti contoh hidung hidung, lendir tahi, dada, kulit, dan lain-lain..

Indeks

  • 1 Yayasan Wright's noda
  • 2 Bahan
    • 2.1 Penyediaan
    • 2.2 Penampan buffered buffered
    • 2.3 Bahan tambahan yang diperlukan untuk melakukan pewarnaan
  • 3 Komponen Wright's noda
    • 3.1 Methanol
    • 3.2 penyerap kejutan
    • 3.3 Eosin (Y)
    • 3.4 Methylene blue
  • 4 Teknik
  • 5 Utiliti
    • 5.1 Hematologi
    • 5.2 Rembatan Nasal
    • 5.3 Parasitologi
    • 5.4 Jangkitan pernafasan
    • 5.5 bakteria
    • 5.6 Mycology
  • 6 Bagaimanakah struktur sampel darah diperhatikan dengan noda Wright??
  • 7 Cadangan untuk pewarnaan yang baik
  • 8 Kesilapan biasa dalam pewarnaan Wrigth
    • 8.1 Pewarnaan sangat pucat
    • 8.2 Rintangan pewarna
    • 8.3 Smear dengan pewarna yang sangat kemerahan atau biru
  • 9 Mod storan
  • 10 Rujukan

Asas noda Wright

Noda Wright dilahirkan dari noda Romanowsky, yang terdiri daripada penyelesaian metil alkohol dari pewarna asid (eosin Y) dan satu asas (metilena biru) dan produk pengoksidaannya.

Campuran pewarna yang digunakan dalam noda Wright mempunyai kesan yang dikenali sebagai Romanowsky, iaitu menyediakan warna ungu yang indah untuk nukleus leukosit dan granul neutrophilic, manakala sel-sel darah merah merah jambu berwarna.

Komponen bertanggungjawab untuk memberi pelbagai biasa warna Wright noda biru B dan eosin Y. Kesan diperhatikan bergantung kepada mengikat pewarna kepada struktur kimia dan interaksi B biru dan eosin Y.

Struktur asid seperti asid nukleik, protein nuklear dan sitoplasma tak aktif reaktif daripada beberapa jenis sel, memperbaiki biru B (pewarna asas).

Walaupun struktur asas seperti hemoglobin, butiran eosinofils yang tersegmentasi, antara struktur selular lain, membetulkan eosin Y (pewarna asid).

Hasil pewarnaan dapat dipengaruhi oleh faktor-faktor yang berbeda, seperti pH pewarna Wright, penampan dan larutan pencuci; serta masa pewarnaan dan penetapan.

Oleh itu, setiap langkah dalam penyediaan reagen adalah penting dan harus dilakukan menjaga setiap detail.

Bahan

Pewarna Wright. Untuk 100 mL diperlukan:

Berat 0.3 gr Wright pewarna, ukur 97 ml metanol dan 3 ml gliserol.

Persediaan

Dalam mortar, letakkan jumlah berat pewarna Wright dan perlahan-lahan tambah gliserol sehingga serbuk dibubarkan sepenuhnya..

Kemudian metanol ditambah, dicampur dan dituangkan ke dalam botol amber.

Sebelum menggunakan penyelesaian perlu digoncangkan dengan gerakan lembut dan penapis.

Buffered buffered

Dalam satu liter air sulingan, 3.76 g disodium hydrophosphate (Na2HPO4   2H20) ditambah 2.1 gr kalium dihydrogen fosfat (KH)2PO4).

Campurkan dengan baik sehingga semua reagen yang diperbuat dibubarkan. Laraskan pH hingga 7.2. Tuangkan ke dalam balang kaca dan simpan pada suhu bilik.

Bahan tambahan yang diperlukan untuk melakukan pewarnaan

Di samping itu, bahan-bahan lain diperlukan untuk menjalankan teknik pewarnaan, iaitu: kepingan yang membawa objek atau penutup objek, jambatan pewarna, pisetas dengan air atau penampan untuk mencuci, jam randik untuk mengambil masa pewarna dan beberapa bahan pengeringan (kertas penyerap, kain kasa atau kapas).

Komponen Wright noda

Methanol

Alkohol (methanol) berfungsi sebagai pembetulan smear darah ke slaid.

Pada asasnya, ia adalah reagen mengurangkan, dehydrator dan pembekuan koagulan. Oleh itu, fungsinya adalah untuk membungkus protein dan menjadikannya tidak larut, tetapi tanpa menghalang mereka.

Methanol adalah reagen yang paling banyak digunakan untuk membetulkan smear di semua makmal, kerana ia memberikan hasil yang lebih baik daripada yang diperolehi dengan etanol. Kepekatan ideal adalah 99%.

Penyerap kejutan

Penampan (larutan buffered) mempunyai fungsi menyesuaikan atau mengekalkan pH pewarna, kerana pH diselaraskan kepada 7.2 adalah penting untuk struktur sel untuk menyerap pewarna dengan betul.

Sebaliknya, laluan penetasan metanol menghilangkan sel-sel dan penampan membantu membiakkan semula mereka.

Eosin (Y)

Eosin mempunyai pertalian untuk komponen asas kerana ia adalah pewarna asid. Dua jenis eosin sangat sama antara satu sama lain, jadi salah satu dari kedua-dua ini boleh digunakan, mendapatkan hasil yang sama.

Yang disebut eosin Y, eosin kuning atau tetrabromofluorescein dan eosin B lain, erythrosin B biru atau dibromodinitrofluorescein. Walau bagaimanapun, eosin Y adalah yang paling biasa digunakan.

Kekayaan yang paling penting dalam pewarna ini adalah polariti negatif, ini menjadikan ia tertarik dengan struktur selular dengan caj positif.

Biru metilena

Ia adalah pewarna asas. Harta utamanya adalah metachromasia, iaitu, tidak semua struktur akan dicelup dengan warna yang sama, ia bergantung kepada komposisi kimia struktur yang mewarnai.

Sesetengahnya akan mengubah cahaya atau biru gelap dan lain-lain gelap ungu atau pucat ungu.

Teknik

1-Menjalankan penyebaran sampel supaya filem nipis kekal, sama ada pada slaid atau penutup.

2-Biarkan udara kering selama kira-kira 2 jam.

3-Letakkan bekas kering kering pada jambatan pewarna atau dulang pewarna dengan sampel menyebarkan ke atas.

4-Cover lembaran dengan drop pewarna Wright oleh penurunan sehingga ia meliputi seluruh permukaan. Biarkan selama 5 - 8 minit.

5-Pewarna harus sepenuhnya menutupi slaid, tanpa tumpahan di tepi. Jika semasa masa pewarna ia mula menguap, titisan tambahan perlu diletakkan.

6-Kemudian tambah jumlah penyerap kejutan yang sama, tolak sedikit sehingga bersinar metalik bersifat. Ambil 10 hingga 15 minit.

7-Basuh dengan air paip, letakkan jet lembut sehingga lembaran kelihatan merah jambu.

8-Dengan kain kasa yang diresapi dengan alkohol, keluarkan pewarna dilekatkan pada bahagian belakang slaid.

9-Benarkan smear kering dengan baik sebelum meletakkan minyak rendaman untuk memvisualkannya dalam mikroskop.

Utiliti

Hematologi

Ia sangat sesuai untuk mengurai smearing darah perifer, untuk memeriksa smear darah tebal dan untuk mengkaji sel-sel dari sampel sumsum tulang.

Oleh kerana sifat-sifat kimia gabungan ini pewarna struktur selular dapat dikenali dengan mudah, dapat membezakan pelbagai jenis sel yang hadir.

Rembesan hidung

Teknik ini sangat berguna untuk mengenal pasti sel-sel rahang hidung (sel epitelium, segmen eosinofil, polimorfonuklear) dalam diagnosis rhinitis alergi.

Parasitologi

Dalam pengertian ini, ia berguna untuk kajian Leishmania sp dalam histiocytes tisu sel subkutaneus dalam ulser kulit. Begitu juga, ia digunakan untuk mengenal pasti leukosit dalam sampel najis (leucogram fecal).

Dalam kes ini, adalah sangat penting bagi doktor mengetahui sama ada leukositosis yang terdapat di dalam najis adalah dengan polimorfonuklear atau mononuklear. Penemuan ini dalam leucogram fecal akan membimbing jika ia adalah jangkitan bakteria atau virus.

Sebaliknya, parasit yang beredar di dalam darah boleh didapati di dalam eritrosit atau bebas dalam plasma. Parasit yang dikehendaki adalah Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii dan filarias, dan dalam perubatan veterinar ia berguna dalam pencarian Theileria equi dan Babesia caballi, ejen penyebab bayi terutamanya di equines.

Wright dan Giemsa noda boleh membezakan hemoparasit daripada komponen sel biasa. Untuk ini anda boleh menggunakan dua jenis spread:

Selang halus

Darah tersebar seperti filem nipis di atas slaid. Tercemar dengan noda Wright, mendedahkan ciri-ciri nukleus dan sitoplasma.

Jatuh tebal

Metodologi ini digunakan untuk menyiasat kehadiran parasit dalam jumlah besar darah.

Untuk ini, setetes darah besar diletakkan pada slaid. Sekali di sana, anda harus defibrinate, membuat bulatan yang lebih besar dan lebih besar dari pusat keluar, dengan menggunakan tepi slaid lain.

Akhirnya, untuk memerhatikan parasit dalam lebam tebal, eritrosit mesti dilepaskan dengan air.

Jangkitan pernafasan

Di peringkat pernafasan teknik ini juga berguna, kerana sel-sel yang ada dalam sampel dahak, bronkial atau bronchoalveolar lavage, penting untuk menentukan diagnosis.

Begitu juga, sel polimorfonuklear dan sel mononuklear boleh dibezakan di sini.

Bakteria

Penggunaan teknik ini dalam bakteria adalah terhad, kerana ia tidak baik untuk mengotorkan bakteria, oleh sebab itu untuk mengotorkan teknik pewarnaan khusus yang lain digunakan.

Walau bagaimanapun, ia telah digunakan untuk mencari sel epitelium dengan badan kemasukan Chlamydia trachomatis dalam mukosa mukosa uretra atau endoservik, walaupun perlu diakui bahawa ia bukan kaedah terbaik untuk ini.

Ia juga mungkin untuk melihat bakteria jenis lingkaran di antara sel-sel darah merah sebagai Borrelia burgdorferi dalam pesakit yang dijangkiti, serta badan morulae atau kemasukan Ehrlichia sp dalam sitoplasma limfosit, monosit atau neutrofil dalam salur darah.

Mycology

The Histoplasma capsulatum adalah kulat patogen yang kerap didiagnosis oleh pemerhatian mikroskopik dari pelbagai sampel tisu, berwarna dengan noda Wright.

Bagaimanakah struktur sampel darah diperhatikan dengan noda Wright?

Cadangan untuk pewarnaan yang baik

Sambungan sampel darah hendaklah udara kering secara spontan. Pewarna haruslah kurus sekecil mungkin untuk mendapatkan pengawetan yang lebih baik dan mengelakkan overcollorations.

Untuk pencelupan yang berkualiti tinggi, disarankan untuk melakukan pewarnaan selama dua jam selepas penyediaan smear itu. Sebaliknya, sampel yang ideal adalah darah kapiler, tanpa antikoagulan.

Walau bagaimanapun, jika darah vena digunakan harus digunakan sebagai EDTA antikoagulan dan heparin tidak, kerana mereka ini boleh berubah bentuk struktur sel.

Untuk mengelakkan kemerosotan warna pewarna yang disediakan harus disimpan di tempat kering.

Semasa proses pembersihan, penggunaan air diselaraskan kepada pH neutral adalah disyorkan.

Akhir sekali, adalah dinasihatkan untuk menguji kaedah pencelupan yang digunakan di makmal setiap seringkali.

Ini dilakukan dengan mewarnai sampel atau corak lanjutan, sebagai kawalan mutu. Langkah ini adalah penting kerana ia memastikan bahawa pewarnaan dengan betul disediakan dan kali pewarnaan dengan baik diseragamkan.

Sekiranya lembaran corak berwarna teruk, maka terdapat masalah yang mesti diselesaikan.

Kesilapan biasa dalam pewarnaan Jahat

Pewarnaan yang sangat pucat

Smear pucat yang sangat pucat, biasanya disebabkan oleh masa yang sangat singkat pewarnaan atau basuh yang sangat dibesar-besarkan. Ia diperbetulkan dengan memanjangkan masa hubungan dengan pewarna atau dengan mengurangkan masa pembasuhan.

Dye mendahului

Pemendakan pewarna smear mungkin mempunyai beberapa sebab, bagaimanapun, punca yang paling kerap ialah: penggunaan pewarna pewarna yang tidak ditapis di jambatan mewarna tidak sekata, menggunakan cadar kotor dengan debu atau gris, adakah mencuci yang baik yang Selesaikan pewarnaan.

Selesema dengan pewarna yang sangat merah atau biru

Penampan ini bertanggungjawab untuk pH pewarna tersebut. Pewarna dengan pH di bawah yang ditunjukkan (asid) akan menghasilkan smear yang sangat merah.

Sekiranya pH pewarna di atas (alkali), satu smear yang sangat berbiru akan diperolehi.

Mod storan

Reagen harus disimpan pada suhu bilik.

Rujukan

  1. V. Gutierrez Kajian perbandingan antara kaedah pewarnaan Wright dan ujian Elisa untuk diagnosis Erlikiosis taring di bandar San Pedro Sula, Honduras. 2008. Tesis Darjah untuk memohon Tajuk Doktor Veterinar. Universidad de San Carlos de Guatemala.
  2. Lopez-Jácome L, Hernandez-Durán M, C Colin-Castro, Pena-Ortega S, G Ceron-González, pewarna F. Franco-Cendejas asas dalam makmal mikrobiologi. Penyelidikan Hilang Upaya. 2014; 3 (1): 10-18.
  3. "Wright's noda." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 18 Mei 2018, 12:05 UTC. 8 Dis 2018, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Kekerapan Babesia spp. dalam kuda montería, Cordoba (Colombia). Wahyu udcaactual divulg cient.  2013; 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  6. Retamales E, Mazo V. Institut Kesihatan Awam Kerajaan Chile. Cadangan untuk pewarnaan darah untuk membaca kiraan darah.