Asas pewarnaan negatif, teknik, kelebihan dan kekurangan



The dendam negatif Ini adalah kaedah pewarna khas untuk menyerlahkan kehadiran kapsul dalam sesetengah mikroorganisma-terutamanya Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Neoformans Cryptococcus-, dari sampel klinikal atau budaya tulen.

Contoh langsung yang biasa digunakan untuk memakai pewarnaan negatif ialah cecair serebrospinal. Teknik ini merupakan alternatif yang cepat untuk diagnosis yang mengandaikan meningitis, terutama sekali Neoformans Cryptococcus.

Begitu juga, noda ini boleh digunakan pada cecair dan cecair steril secara amnya, serta pada strain yang diperoleh dari budaya murni muda. Teknik ini menggunakan nigrosin atau tinta Cina untuk pelaksanaannya; Oleh itu, ia adalah metodologi yang sangat mudah dan ekonomi untuk memohon yang memberikan maklumat nilai diagnostik yang besar dalam masa yang singkat.

Dalam pengertian ini, mana-mana makmal dapat melakukan pewarnaan ini. Sudah tentu, makmal mesti mempunyai kakitangan yang kompeten, yang mampu mengiktiraf ragi Neoformans Cryptococcus terpencil atau tunas dan membezakannya daripada leukosit dan artifak yang boleh didapati oleh sampel.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Teknik
    • 2.1 Bahan
    • 2.2 Spesifikasi untuk pensampelan
    • 2.3 Pelaksanaan teknik dengan sampel langsung
    • 2.4 Pelaksanaan teknik dengan strain dari budaya
    • 2.5 Pemerhatian dalam mikroskop
  • 3 Kelebihan
  • 4 Kelemahan
  • 5 Mengecat tisu dengan dakwat India
  • 6 Rujukan

Yayasan

Tindakan nigrosin dan dakwat India dengan cara yang sama; oleh itu, salah satu daripada kedua-dua bahan itu boleh digunakan secara bergantian.

Teknik ini dinamakan pewarnaan negatif kerana ia bertindak bertentangan dengan teknik pewarnaan yang lain. Dalam hal ini apa yang masih tidak dikehendaki ialah struktur yang sedang dicari atau yang anda mahu lihat; iaitu mikroorganisma.

Oleh itu, pewarna adalah berdasarkan pencelupan bahagian bawah smear dalam warna gelap. Dalam senario ini, struktur yang dihadkan akan diserlahkan dalam warna cahaya atau tidak berwarna.

Secara umumnya, ragi yang diamalkan refringent, dikelilingi oleh halo yang jelas yang sesuai dengan kapsul. Ini berlaku kerana dakwat Cina dan nigrosin adalah bahan yang tidak dapat menembusi polysaccharide yang membentuk kapsul mikroorganisma hidup.

Perlu diperhatikan bahawa struktur lain yang mungkin terdapat dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah, tidak menembusi.

Sekarang, jika mikroorganisma mati, tincture boleh menembus di dalamnya, sedemikian rupa sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk menilai daya maju mikroorganisma.

Teknik

Bahan

Nigrosin

Nigrosin berhutang namanya kepada warna hitam yang ada. Ia adalah bahan sintetik yang diperolehi dengan memanaskan campuran-seperti sebatian organik seperti nitrobenzene, aniline dan aniline hydrochlorite menggunakan pemangkin dalam tindak balas berkata (besi atau tembaga).

Dakwat Cina

Dakwat Cina adalah bahan yang digunakan terutamanya oleh orang Asia untuk menulis, membuat lukisan seni dan lukisan monokromatik. Ia sangat popular dalam budaya Cina.

Ia diperolehi daripada dakwat cumi yang dicampur dengan arang batu yang dihancurkan, hasil pembakaran pokok-pokok resin yang sedikit.

Ia juga mungkin untuk mempersiapkannya dari jelaga pembakaran hidrokarbon (minyak sayuran), bersama dengan gelatin protein yang memberikannya konsistensi yang tepat untuk menghalang pemendakan zarah-zarah karbon.

Spesifikasi untuk pensampelan

- Tidak memerlukan puasa.

- Sampel CSF, cecair atau cairan steril mesti mengandungi sekurang-kurangnya 1 ml jumlah dan mesti dipindahkan ke suhu bilik di makmal dengan segera.

- CSF dan sampel cecair steril perlu diambil oleh doktor khusus.

- Ia juga boleh menjadi budaya tulen strain suspek yang dikaitkan dengan patogen yang dinyatakan di atas.

Pelaksanaan teknik dengan sampel langsung

- Sampel mestilah disentrifugasi, maka supernatan dibuang dan sedimen diambil.

- Satu setitik bahan sentrifuged (sedimen) dan setitik dakwat Cina atau nigrosin diletakkan pada slaid bersih..

- Ia perlu dicampur dengan baik dan dilapisi dengan slip penutup, membolehkan titisan menyebar seperti filem tipis tanpa melebihi tepi.

- Seterusnya penyediaan dipasang di mikroskop.

- Sekiranya penyediaan terlalu gelap, ia boleh dicairkan dengan air.

Pelaksanaan teknik dengan strain dari budaya

- Sebilangan kecil tanaman muda diambil dengan jarum pembenihan dan dibubarkan dalam setitik dakwat Cina sebelum diletakkan di atas slaid bersih.

- A coverlip diletakkan di atas.

- Ia diperhatikan dalam mikroskop pada 10X dan kemudian pada 40X.

Anda juga boleh membubarkan sebahagian tanah jajahan dalam air sulingan, dan dari sana ambil setitik dan campurkan dengan dakwat. Dengan cara ini penyediaan tidak begitu tebal, sehingga memungkinkan untuk memerhatikan struktur secara terpisah; Jika terdapat aglomerasi, ia tidak akan diperhatikan dengan baik.

Kaedah lain adalah seperti berikut:

- Letakkan satu drop budaya dalam penggantungan pada satu hujung slaid.

- Letakkan setitik nigrosin pada hujung yang sama dan campurkan.

- Dengan bantuan slaid lain, hamparkan sampel itu seolah-olah anda melakukan smear hematologi.

- Biarkan kering dan perhatikan di bawah mikroskop.

Pemerhatian dalam mikroskop

Mula-mula anda harus memberi tumpuan dengan objektif 10X untuk mempunyai pandangan luas bidang. Selepas itu anda harus mencari jika ada ruang yang jelas; jika ada, fokus dengan 40X untuk melihat butirannya.

Kelebihan

- Ia mudah dilaksanakan.

- Ini adalah teknik ekonomi.

- Kaedah ini tidak memerlukan smear yang diperbetulkan kepada haba atau bahan kimia; oleh itu, mikroorganisma diperhatikan tanpa gangguan.

- Penyediaan segar tidak perlu dikeringkan, sehingga dapat diamati dengan segera, menghasilkan hasil dengan cepat.

Kelemahan

Setelah dipasang, persediaan segar harus segera diperhatikan; Sekiranya mereka dibenarkan kering, tidak mungkin lagi untuk memerhatikan mereka dan yang baru.

Mengecat tisu dengan dakwat India

Satu lagi fungsi yang boleh dipenuhi dakwat Cina adalah makmal patologi. Ini digunakan untuk mengambil sampel tisu dengan pembedahan untuk menandakan margin reseksi tumor.

Tisu yang ditanda disembur dengan asid asetik. Ini bertindak sebagai mordan dan menghalang dakwat dari tenggelam apabila tisu tertakluk kepada pemprosesan rutin untuk penyediaan biopsi.

Prosedur ini terdiri dalam mandi tisu dalam alkohol dan xilena, dan kemudian menyerap dalam lilin parafin. Tanda ini membimbing ahli patologi apabila memerhati tisu, yang menunjukkan di mana margin reseksi pembedahan atau titik minat yang lain.

Rujukan

  1. "Nigrosina". Wikipedia, ensiklopedia percuma. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
  2. "Dakwat Cina". Wikipedia, ensiklopedia percuma. 1 Okt 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
  3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J dan kolaborator. (2006). Pekerja Buruh Komuniti Otonomi Extremadura. Agenda khusus Jilid IV. MAD Editorial. Seville-Sepanyol, ms 211-212.
  4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Juruteknik makmal pakar, Perkhidmatan Kesihatan Galician (SERGAS). Perkara perkara tertentu 2. MAD Editorial. Seville-Sepanyol, ms 79-80.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial